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產(chǎn)品名稱：小鼠食管上皮細(xì)胞

組織來源：食管組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細(xì)胞簡介：

小鼠食管上皮分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過程中，食管的上皮細(xì)胞增殖，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復(fù)層扁平上皮，耐摩擦，有保護作用。在食管與胃賁門交界處，復(fù)層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。食管被一層線性排列的、無角化、潮濕的復(fù)層扁平上皮細(xì)胞覆蓋，其頂端細(xì)胞膜和細(xì)胞間連接復(fù)合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細(xì)胞的基質(zhì)外側(cè)細(xì)胞膜和深層細(xì)胞的全部細(xì)胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動的滲透壓之下。從組織學(xué)上講，食管上皮由兩層組成，基底層和分化層；其中，僅基底層的細(xì)胞可以增殖，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標(biāo)記的依序表達(dá)。食管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機制和食管癌變機制的非常好的體外模型。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠食管上皮采用機械分離法結(jié)合組織貼塊法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的小鼠食管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠脂肪甘油三酯酯酶（ATGL）試劑盒   96T/48T

小鼠脂多糖（LPS）試劑盒   96T/48T

小鼠脂蛋白脂酶(LPL)試劑盒   96T/48T

小鼠脂蛋白相關(guān)0脂酶A2(Lp-PL-A2)試劑盒   96T/48T

小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand (sAIL) ELISA Kit 人可溶性壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)試劑盒

Human17-ketosteroids,17-KSELISAKit 人17-酮類固醇(17-KS)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3(Human1,25-dihydroxyvitaminD3)ELISAKit人1,25二羥基3

飲料糖精(saccharin)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒規(guī)格：96T/48T

β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶2抗體

PE標(biāo)記人Bcl-2單克隆抗體

IGSF8重組小鼠 PGRL / IGSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

半乳糖凝集素7(GAL7)重組蛋白 Recombinant Galectin 7 (GAL7)

CD58重組人 LFA-3 / CD58 蛋白 Protein

CD276 Protein Human 重組人 B7-H3 / CD276 蛋白

CD86 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白

半乳糖凝集素7(GAL7)重組蛋白 Recombinant Galectin 7 (GAL7)

CD276 Protein Human 重組人 B7-H3 / CD276 蛋白

IGSF8重組小鼠 PGRL / IGSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CD86 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD86 / B7-2 蛋白

CD58重組人 LFA-3 / CD58 蛋白 Protein

小鼠食管上皮細(xì)胞大鼠多巴胺D2受體配體(D2RL)試劑盒 ，英文名： D2RL ELISA Kit

Porcine heat shock protein 20 (HSP-20) ELISA Kit 豬熱休克蛋白20(HSP-20)試劑盒

蝦特定基因序列(FC)核酸試劑盒 48T

CLIAKitforLUM(Humanlumican)ELISAKit人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白

體液總抗氧化能力(TAC)比色法(DDPH)定量試劑盒50次

ELISAKitHA雞透明質(zhì)酸

收到細(xì)胞如何處理？

1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。

2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。

5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進行傳代操作