規(guī)格：1×10⁶

儲(chǔ)存條件：活細(xì)胞儲(chǔ)存于25℃ ~ 37℃，收到后請(qǐng)立即放入CO₂培養(yǎng)箱。

凍存細(xì)胞暫存于-80℃冰箱，液氮*儲(chǔ)存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

人類ES細(xì)胞產(chǎn)品是一種高度未分化的細(xì)胞產(chǎn)品。該產(chǎn)品采用埃德斯生物的人類多能干細(xì)胞條件培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)與傳代。人類ES細(xì)胞是從早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。同時(shí)具有發(fā)育*性，能在解除分化抑制的條件下參與各種組織的發(fā)育，分化成人體所有組織和器官包括：心肌細(xì)胞、造血細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、生殖細(xì)胞等?？蔀榧?xì)胞遺傳操作和分化研究提供豐富的實(shí)驗(yàn)材料。

包含材料：

培養(yǎng)材料準(zhǔn)備：

PSC Condition Medium培養(yǎng)基：在2-8℃解凍PSC Condition Medium添加劑，離心后混勻，隨后將添加劑加入PSC Condition Medium基礎(chǔ)培養(yǎng)基（每1ml添加劑與50ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合），PSC Condition Medium培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存2周。

注意：PSC Condition Medium添加劑只能在2-8℃解凍，可按實(shí)際用量對(duì)添加劑進(jìn)行分裝，分裝后重新置于-20- -80℃保存， 避免反復(fù)凍融。

基質(zhì)膠包被培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶：往培養(yǎng)皿/瓶中添加即用型基質(zhì)膠工作液（iMedCell: Cat. no.ME-1001007）至*覆蓋皿/瓶底，37℃靜置2小時(shí),然后室溫平衡30min或2-8℃靜置過夜備用。如果暫時(shí)不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 儲(chǔ)存，并于1周內(nèi)使用。即用型基質(zhì)膠使用完畢后立即放回4度保存。

操作方法

細(xì)胞復(fù)蘇：

1.    將PSC Condition Medium培養(yǎng)基取出并放置至室溫；取出包被過的培養(yǎng)皿/瓶，室溫平衡20-30min。

2.    37℃水浴解凍細(xì)胞，小心搖晃使細(xì)胞融化至僅剩一小塊冰晶，迅速取出并用70%酒精消毒凍存管外表面，轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)中。

3.    將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的15ml離心管中，緩慢加入4ml PSC Condition Medium培養(yǎng)基，輕柔吹吸2次混勻。

4.    150Xg離心3分鐘。

5.    吸掉上清，加入適量PSC Condition Medium培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕柔吹吸2次混勻，并接種到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察細(xì)胞呈多個(gè)細(xì)胞組成的團(tuán)塊。

6.    水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO₂的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。

7.    吸掉原來培養(yǎng)基，加入新鮮的PSC Condition Medium培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每天更換。

細(xì)胞傳代：

當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%；細(xì)胞克隆太大，中間生長(zhǎng)不良；或細(xì)胞克隆邊緣開始分化等情況出現(xiàn)時(shí)，細(xì)胞需要傳代。

傳代比例：

通常早代次(<10代)的干細(xì)胞需要以較低的比例傳代，如1:2-1:3；成功建系的干細(xì)胞（10代以上）可以1:4-1:5的比例傳代，傳代的比例由細(xì)胞株的生長(zhǎng)速率決定。

比較理想的傳代時(shí)間間隔是3-5天一次，剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞*次傳代時(shí)間一般是復(fù)蘇后第5天。

人類多能干細(xì)胞（ES/iPS）傳代操作：

1.    將PSC Condition Medium培養(yǎng)基取出并在室溫平衡15分鐘，取出基質(zhì)膠包被過的培養(yǎng)皿/瓶在室溫平衡20-30分鐘，PBS緩沖液和干細(xì)胞無酶消化液（iMedCell: Cat. no.ME-1001008）傳代工作液37℃水浴預(yù)熱。

2.    吸走PSC Condition Medium培養(yǎng)基，加入PBS溶液洗一次。

3.    加入干細(xì)胞無酶消化液使之*覆蓋皿/瓶底。

4.    室溫孵育5-6分鐘或37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，停止消化。

5.    吸去干細(xì)胞無酶消化液，即刻加入新鮮的PSC Condition Medium*培養(yǎng)基，用1ml槍扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的干細(xì)胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻，制成干細(xì)胞懸液。

注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過10次為宜，盡量避免形成單細(xì)胞。如有少量細(xì)胞無法從皿底脫落，屬于正常現(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無法從皿底脫落，需延長(zhǎng)消化時(shí)間。