Ni-NTA-瓊脂糖 KIRGEN
- 公司名稱 武漢艾瑞科生物科技有限公司
- 品牌 KIRGEN/科進
- 型號
- 產地
- 廠商性質 代理商
- 更新時間 2015/6/5 10:47:59
- 訪問次數 402
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產品名稱: Ni-NTA-瓊脂糖 KIRGEN
KG8222 Ni-NTA-瓊脂糖 25ml
KG8223 Ni-NTA-瓊脂糖 50ml
Ni-NTA-瓊脂糖 KIRGEN蛋白提純原理:NI-NTA主要用于帶His標簽蛋白的親和層析.
① Ni-NTA:瓊脂糖或者其他基質共價連接NTA基團,NTA基團與Ni形成四價螯合物,并留下Ni兩價用于與其他基團結合.同樣作用的還有IDA基團,但NTA相對比較耐還原劑,因此使用較多.
② 組氨酸(His)的R基上帶有1個咪唑基團,咪唑基團pKa值在6左右,在pH>7的條件下,咪唑基團帶負電,容易與Ni離子結合.
③ 因此通過Ni-NTA吸附住的蛋白可以使用咪唑、組氨酸、或者其他含N化合物進行競爭洗脫,也可以通過降低pH值使咪唑基團帶正電從而洗脫蛋白.
④ NI-NTA上的Ni可以通過EDTA進行螯合競爭洗脫下來.
⑤ 同樣的道理,其他過渡金屬離子如Cu2+、Co2+等也能起到和Ni一樣的作用,但是相比來說,Ni不容易引起蛋白變性.所以Ni柱較為常用.
⑥ 除了組氨酸外,還有一些氨基酸殘基如半胱氨酸等也能與金屬結合,但結合力比起組氨酸來說較弱.可以通過加入NaCl等消除這種吸附.
產品說明:鎳NTA親和層析介質,是由螯合劑(NTA)共價偶聯(lián)到Sepharose瓊脂糖介質(6%交聯(lián)度)上,再螯合Ni2+而成。該介質對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力,采用Sepharose瓊脂糖介質比Agarose瓊脂糖介質效果更好,顆粒粒度均勻,粒徑小,并且螯合鎳更穩(wěn)定,能耐受更高的還原劑,物理和化學穩(wěn)定性好,批次重復性好。已經螯合好鎳離子,可直接用于6×His-tag融合蛋白的純化。