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尼龍膜、PVDF膜、NC膜區(qū)別

來源:北京索萊寶科技有限公司   2015年11月19日 15:55  

轉(zhuǎn)印膜:用于蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢驗過程的微孔膜。

Southern blot:又稱Southern印跡雜交,是研究DNA圖譜的基本技術(shù)。

Northern blot:又稱Northern印跡雜交,是檢測RNA的基本技術(shù)。

Western blot:又稱Western印跡雜交,是蛋白質(zhì)檢測分析的基本技術(shù)。

轉(zhuǎn)印膜在蛋白質(zhì)和核酸的轉(zhuǎn)移和檢測過程中應(yīng)用廣泛,不同的轉(zhuǎn)印膜規(guī)格和參數(shù)不同,選擇正確、均一穩(wěn)定的轉(zhuǎn)印膜對達到好的實驗結(jié)果起到關(guān)鍵性的作用。

常用的三種轉(zhuǎn)印膜:硝酸纖維素膜(NC膜)、帶正電的尼龍膜(N66膜)、聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)

轉(zhuǎn)印

  • 結(jié)合能力:帶正電的尼龍膜>PVDF>硝酸纖維素膜。

尼龍膜結(jié)合DNARNA能力可達480600μg/cm2,可結(jié)合短至10bp的核酸片段;硝酸纖維素膜結(jié)合DNARNA能力可達80100μg/cm2,對于200bp的核酸片段結(jié)合能力不強;PVDF膜結(jié)合DNARNA能力可達125300μg/cm2。

  • 結(jié)合穩(wěn)定性

更好的機械強度和化學耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,特別是需要做N端蛋白測序,在相當“嚴酷”的清洗條件下,當尼龍膜或者硝酸纖維素膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇,但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15)再用緩沖液平衡,才能用。

  • 溫度耐受性:

尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后,核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合;硝酸纖維素膜依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA,結(jié)合不牢固;PVDF膜結(jié)合牢固,耐高溫,特別適合于蛋白印跡。

  • 機械強度:

硝酸纖維素膜較脆,易破碎,不能重復(fù)使用;尼龍膜和PVDF膜機械強度較高,可重復(fù)使用。

  • 價格比較:PVDF>硝酸纖維素膜>尼龍膜

  • 可重復(fù)性:

尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交,雜交后,探針分子可經(jīng)堿變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜不能重復(fù)使用;PVDF膜可以重復(fù)使用。

  • 操作簡便性

NC膜的使用很簡便,比如不需要甲醛預(yù)處理,只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC膜很容易封閉,也不需要特別嚴謹?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,又容易卷,操作要小心,不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途。

  • 背景:NC膜和PVDF背景較低;尼龍膜背景高。

  • :

    1、Biodyne B膜:通過高密度的季銨組來增加孔的表面。我們所生產(chǎn)的尼龍膜具有高的靈敏度,適用于各種核酸應(yīng)用。

    BiodyneC膜:可以通過孔表面的羧基組耦合反應(yīng)來導出。

    2、醋酸纖維素膜

    由于醋酸纖維素薄膜對各種蛋白質(zhì)(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都幾乎*不吸附,因此無拖尾現(xiàn)象;電泳后區(qū)帶界限清晰;通電時間較短(二十分鐘至一小時);對染料也沒有吸附,因此不結(jié)合的染料能*洗掉,無樣品處幾乎*無色。由于醋酸纖維素薄膜吸水量較低,因此必需在密閉的容器中進行電泳,并使用較低有電流避免蒸發(fā)。同時其對蛋白的結(jié)合能力較其它轉(zhuǎn)移膜弱些。

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