為什么有的試劑盒是采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法?
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根據(jù)我司資深技術(shù)分析:小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以采用競(jìng)爭(zhēng)法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)生物素化抗體上的結(jié)合位點(diǎn),標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少,zui后的顯色也愈淺,即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);
(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)各種不同類型的檢測(cè)方法。用于臨床檢驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類型:競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時(shí),可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會(huì)有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體有多種模式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,洗滌后再加入酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)。抗HBe的檢測(cè)一般采用此法。
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