人ELISA試劑盒操作步驟

1、將1個(gè)McAb與固相載體連接，形成固相McAb。人ELISA試劑盒洗滌除去未結(jié)合物。

2、同時(shí)加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標(biāo)McAb反應(yīng)形成雙抗體夾心復(fù)合物。洗滌除去未結(jié)合物。

3、加底物顯色。

適用于雙抗體夾心法的人ELISA試劑盒，有些也可用雙位點(diǎn)一步法檢測(cè)。如HBsAg同樣可用此法進(jìn)行檢測(cè)，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清(或血漿)，同時(shí)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的另一個(gè)抗HBs(酶結(jié)合物)，如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加入底物，通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結(jié)合物，

加底物后就不顯色。

1.吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
2.液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
3.孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。
4.由于底物顯色劑對(duì)光及其敏感，因此要避光保存。
5.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。人ELISA試劑盒應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。