臺盼藍染色液使用說明書
貨號:C0040
規(guī)格:50ml、100ml
保存:4℃保存,一年有效。
產(chǎn)品簡介:
臺盼藍(Trypan Blue)或稱臺盼蘭、錐蟲藍,是細胞活性染料,常用于檢測細胞膜的完整性與細胞的存活率,是組織和細胞培養(yǎng)中常用的死細胞鑒定染色方法之一。正常的活細胞細胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍,細胞不會被染成藍色;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經(jīng)死亡。
臺盼藍可被巨噬細胞吞噬,故可用于巨噬細胞的活體染色劑。凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。臺盼藍染色后,通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù),就可以對細胞存活率進行比較的定量。染色時間只需3-5分鐘,操作簡單。
臺盼藍染色液使用說明:
1. 收集細胞:
用胰酶和/或EDTA消化貼壁細胞,懸浮細胞可直接收集。收集的細胞時用1000-2000 rpm離心1分鐘,棄上清,制備單細胞懸液,并做適當稀釋。
2. 臺盼藍染色:
細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1比例混勻(終濃度0.04%),染色3分鐘 ( 染色3分鐘時間已經(jīng)足夠,但染色時間可以更長一些,但不宜超過10分鐘) 。
3. 細胞計數(shù):
吸取少量經(jīng)過染色的細胞,用血細胞計數(shù)板計數(shù)。死細胞著藍色并膨大,無光澤;活細胞不著色并保持正常形態(tài),有光澤。通常要比較地進行定量,每個細胞樣品至少數(shù)500 個細胞。
細胞存活率(%)= 活細胞總數(shù)/(活細胞總數(shù)+死細胞總數(shù))×100%
注意事項:
1. 染色時間不能太長,否則活細胞也會逐漸積累染料而染成顏色,使檢測結(jié)果偏低;
2. 有潛在致癌危險,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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