描述: 內(nèi)皮細胞生長因子（ECGF）是一種從牛大腦中提取出來的，含有能夠促進哺乳動物血管內(nèi)皮細胞生長的因子。 也有報道稱ECGF對用于單克隆抗體生產(chǎn)的雜交瘤細胞的融合和生長有一定的輔助作用。制備內(nèi)皮細胞生長因子的方法是根據(jù)Maciag等的方法（1979）修改過的，是從含有氯化鈉和硫酸鏈霉素的溶液中無菌凍干而來的。
人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）可以用傳統(tǒng)的方法進行原代培養(yǎng)。這些細胞的持續(xù)增殖已被證明是非常困難的。牛腦中的提取物可以保證這些細胞的長期體外增殖。在細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中加入纖維連接蛋白或膠原基質(zhì)可以培養(yǎng)內(nèi)皮細胞。當加入ECGF后，在細胞培養(yǎng)液中加入胎牛血清的量可以減少。肝素可以提高ECGF有絲分裂的活性。 有報道稱在培養(yǎng)雜交瘤和其他類型的細胞時，加入ECGF后可以不用加入飼養(yǎng)層細胞。 
宿主: 牛
純化: 粗提物
緩沖液: H₂O, w/o 防腐劑
形式: 凍干粉 
使用說明:內(nèi)皮細胞生長因子是經(jīng)過無菌凍干的，每小瓶含6毫克蛋白。原液的配制：用2毫升預(yù)熱（37℃）的滅菌平衡鹽溶液溶解蛋白，溫和旋轉(zhuǎn)小瓶使干粉溶解。原液可進一步用無菌組織培養(yǎng)液稀釋到所需的工作濃度。雖然原液可加入無菌組織培養(yǎng)液中，建議將稀釋的蛋白無菌過濾后使用。6毫克ECGF可以加入 500毫升的培養(yǎng)基中。 
生物活性/工作濃度: 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC），ECGFzui適宜的工作濃度是50-200 μg/ml。 加入50 μg/ml肝素后，ECGFzui適宜濃度是10 μg/ml. 作為制備單克隆抗體的輔助生長因子，ECGF的zui適宜濃度是25- 100 μg/ml. 
種屬的特異性: 牛ECGF 可以作用于牛，鼠和人的細胞。 
保存條件：
溶解之前保存 2-8 °C。 溶解之后，溶液保存在 –20 °C。
推薦將溶解后溶液保存在 -20°C。避免反復凍融。 
使用: 牛ECGF 只用于科研，不能應(yīng)用于臨床! 
產(chǎn)品編號: 300-090-5 規(guī)格: 5x 6 mg 
參考文獻: [Maciag T （1982） JBC 257:5333; Olander J （1980） In Vitro 6:209; Folkman J （1980） Nature 288:551; Evans CH （1982） JNCI 68:127; Pintus C （1983） J Immuno Meth 61:195; Maciag T （1979） PNAS 6:5674; Thornton SC （1983） Science 222:623; Ransom JH （1986） Methods Enzymol 121:293]
ECGF 用于HUVEC細胞培養(yǎng)

ECGF用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）的zui適濃度范圍是100-300 μg/ml，加入肝素（50 μg/ml）后的zui適濃度范圍是10-20 μg/ml。作為一種生長添加物用于單克隆抗體的生產(chǎn)，zui適濃度范圍是25-100 μg/ml。牛和豬ECGF因子對小鼠細胞，牛細胞和人細胞起作用。

Protocol:
- 每孔中生長培養(yǎng)基（EGM）中的細胞濃度是5-7 x 10³ cells
- 過夜培養(yǎng)細胞[如果實驗很急,可以將早上培養(yǎng)的細胞下午進行換液。將生長培養(yǎng)基換成基礎(chǔ)培養(yǎng)基（EBM）]
- 將生長培養(yǎng)基換成基礎(chǔ)培養(yǎng)基（HUVEC: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +1-2% 胎牛血清）
- 培養(yǎng)24h
- 再次換液，加入因子 （生長因子，抑制劑，等等）
- 培養(yǎng)18h
- 加入10u l 3H-胸腺嘧啶溶液[0.025mCi/ml]/孔 （=0.25u Ci）
- 37°C再培養(yǎng)6h
- 洗滌步驟：（250ul/孔）
       PBS        一次
       MeOH     兩次，每次5min
       TCA        兩次，每次10min
       H₂O        一次
- 每孔加入250 ul 0.3M NaOH，裂解細胞
- 將2.5 ml ECO加入到相應(yīng)的閃爍計數(shù)瓶中
- 將細胞裂解液加入的閃爍計數(shù)瓶中
- 用閃爍液體計數(shù)（-計數(shù)器;貝克曼儀器公司）

ECGF內(nèi)皮細胞生長因子添加劑（全）用于制備500ml內(nèi)皮細胞生長培養(yǎng)基 
With VEGF165 for microvascular endothelial cells（含VEGF165用于微血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)）

 With VEGF-C for lymphatic endothelial cells（含VEGF-C用于淋巴內(nèi)皮細胞培養(yǎng)）

生物活性/工作濃度: Optimum concentration for human microvascular endothelial cells （HMEC） range from 100-300 μg/ml, optimal concentration with heparin （50 μg/ml） is at 10-20 μg/ml. Bovine ECGFpro1 and ECGFpro2 are effective on mouse, bovine and human cells. Each vial contains enough growth factor supplement and VEGF-A or VEGF-C for optimal growth conditions for blood or lymph endothelial cells.

ECGF用于人微血管內(nèi)皮細胞（HMEC）培養(yǎng)的zui適濃度范圍是100-300 μg/ml，加入肝素（50 μg/ml）后的zui適濃度范圍是10-20 μg/ml。牛ECGFpro1因子和牛ECGFpro2因子對小鼠細胞，牛細胞和人細胞起作用。每瓶中含有足夠多的生長因子添加物和VEGF-A或VEGF-C，可以為血液或者淋巴內(nèi)皮細胞提供zui適生長環(huán)境。

生物活性/工作濃度: Optimum concentration for human umbilical vein endothelial cells （HUVEC） range from 100-300 μg/ml, optimal concentration with heparin （50 μg/ml） is at 10-20 μg/ml. As a growth supplement for use in monoclonal antibody production the optimum range is 25 to 100 μg/ml. Bovine and porcine ECGF is effective on mouse, bovine and human cells.