來源：醫(yī)研三人行

各位熱愛科研的小伙伴們，你是科研小白還是準備上研一的師弟師妹們，戴師兄給你帶來一系列體內(nèi)腫瘤動物模型構(gòu)建及評價專題：CT26結(jié)直腸癌模型皮下及原位小鼠構(gòu)建。

PS:CT26細胞是一種源自小鼠的結(jié)腸癌細胞系，廣泛用于腫瘤學研究，尤其是在研究腫瘤免疫學和抗癌藥物測試中。

另外：同源CT26結(jié)直腸癌小鼠代表一種特征明確且廣泛使用的癌癥惡病質(zhì)模型 。腫瘤的生長導致身體和肌肉重量減輕，主要是通過增強脂肪和蛋白質(zhì)分解代謝。隨著腫瘤生長，還觀察到肝腫大和脾腫大，以及急性期反應的激活和促炎細胞因子水平的升高。

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寫在前面

皮下和原位腫瘤細胞動物模型的相同點

1）研究目的：兩種模型都用于研究腫瘤的生長、進展、轉(zhuǎn)移機制，以及評估抗腫瘤藥物和治療方法的效果。

2）成瘤性：在兩種模型中，腫瘤細胞都能在宿主動物體內(nèi)生長形成腫瘤，并被用于評估腫瘤的生長速率、體積以及對治療的反應。

皮下和原位腫瘤細胞動物模型的不同點

1）腫瘤植入位置不同：皮下腫瘤模型：將腫瘤細胞注射到動物的皮下組織中，通常選擇在背部或側(cè)腹部。原位腫瘤模型：將腫瘤細胞注射到原發(fā)腫瘤發(fā)生的器官或組織中（例如將結(jié)腸癌細胞注射到小鼠的結(jié)腸中）。

2）腫瘤微環(huán)境：皮下腫瘤模型：由于腫瘤細胞被植入到皮下組織中，其微環(huán)境與原發(fā)腫瘤的位置不同，因此可能不wan全反映出原發(fā)腫瘤的行為。原位腫瘤模型：腫瘤細胞被植入到其原發(fā)組織或器官中，因此更好地模擬了腫瘤的生理微環(huán)境，包括血供、基質(zhì)細胞、免疫細胞和局部信號分子。

3）其他：臨床相關(guān)性、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移、操作難度的不同。

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CT26結(jié)直腸癌模型皮下小鼠構(gòu)建

• 實驗材料

1）CT26細胞：常規(guī)復蘇后擴增培養(yǎng)，至少傳代2次后收獲對數(shù)生長期的細胞。

2）BALB/c小鼠：雄性：16~22g/6~8周齡（shou選）；雌性：14~18g/6~8周齡。（注：適應性飼養(yǎng)1周）

• 實驗方法

1）C26 細胞的生長和制備（注：為了實現(xiàn)更好的實驗間重現(xiàn)性，盡可能收集傳代次數(shù)低的細胞）

2）小鼠準備及麻醉：通過吸入異氟醚（氧氣 3%）麻醉小鼠。在進行腫瘤接種所需的時間內(nèi)僅將動物保持在麻醉狀態(tài)。確保鼠放在加熱墊上，以防止身體熱量流失。在開始腫瘤注射之前，通過輕輕捏后腳趾來確認適當?shù)穆樽怼?/p>

3）使用無菌1 ml胰島素注射器和26號針頭，將0.2mL含有腫瘤細胞（500萬/只）的溶液快速注射到小鼠右側(cè)腋下的脂肪墊皮下。（注：對照動物將在相同位置接受0.2mL無菌鹽水溶液。）（注：細胞濃度通常為1×10^6~1×10^7個細胞/ml）

4）將動物放回籠子里。每 15 分鐘至少直接觀察一次鼠，直到它可以對溫和的操作做出反應并恢復翻正反射，最后再放回籠子內(nèi)集中飼養(yǎng)，確保提供足夠的水和食物。

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CT26結(jié)直腸癌模型原位小鼠構(gòu)建

• 實驗材料

1）CT26細胞或者CT26瘤塊：細胞培養(yǎng)同上；瘤塊組織（直接用皮下成瘤的瘤塊進行原位接種（1mm3左右的直徑大小））

2）基質(zhì)膠：Corning Matrigel是最chang用的基質(zhì)膠（基質(zhì)膠：細胞體積=1:1）

3）BALB/c小鼠：雄性：16~22g/6~8周齡（shou選）；雌性：14~18g/6~8周齡。（注：適應性飼養(yǎng)1周）

4）手術(shù)工具：手術(shù)刀、剪刀、鑷子、止血鉗、縫合針線等

• 實驗方法

1）小鼠準備及麻醉：通過吸入異氟醚（氧氣 3%）麻醉小鼠。在進行腫瘤接種所需的時間內(nèi)僅將動物保持在麻醉狀態(tài)。確保鼠放在加熱墊上，以防止身體熱量流失。在開始腫瘤注射之前，通過輕輕捏后腳趾來確認適當?shù)穆樽怼?/p>

2）準備手術(shù)區(qū)：剪除小鼠腹部毛發(fā)，用碘伏和75%乙醇消毒手術(shù)區(qū)。

3）腹腔切口：在小鼠下腹部正中線沿腹白線做一小切口（約1~2 cm），切開皮膚和腹膜，暴露腹腔內(nèi)容物。（注：開口不要開太大，避免感染）

4）暴露結(jié)腸：小心分離并輕輕牽引結(jié)腸，確保不損傷周圍組織。

5）細胞注射：使用注射器（常用26或27號針頭）吸取預先準備好的CT26細胞懸液。將注射器的針頭插入結(jié)腸壁，緩慢注射約50-100 μl的CT26細胞懸液。注射位置一般選擇結(jié)腸的中段或直腸靠近肛men處，以模擬人類直腸癌的發(fā)生位置。（確保細胞懸液均勻分布，并避免針頭穿透腸壁。）

或者瘤塊接種：用套管針將瘤塊注射結(jié)腸的中段或直腸靠近肛men處，以模擬人類直腸癌的發(fā)生位置。

6）縫合傷口：輕輕將結(jié)腸放回腹腔內(nèi)，確保沒有捻轉(zhuǎn)或扭曲。用縫合針線將腹膜和皮膚分層縫合。

7）將動物放回籠子里。每 15 分鐘至少直接觀察一次鼠，直到它可以對溫和的操作做出反應并恢復翻正反射，最后再放回籠子內(nèi)集中飼養(yǎng)。確保提供足夠的水和食物，并注意觀察術(shù)后可能出現(xiàn)的感染或不適癥狀。

8）腫瘤生長檢測：每隔2-3天觀察小鼠的體重、活動狀態(tài)和糞便情況。根據(jù)需要在適當?shù)臅r間點（實驗經(jīng)驗為14天后）進行小鼠的安le死，并解剖檢測原位腫瘤的生長情況和轉(zhuǎn)移情況。

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實驗經(jīng)驗及注意事項

1. 皮下腫瘤的觀察：在di一階段，腫瘤只能通過觸診來定位，并且表現(xiàn)為皮膚的小突起。在第二階段，觀察到腫瘤為皮下腫塊。極少數(shù)情況下，腫瘤會潰爛，導致開放性傷口；在這種情況下，小鼠被排除在實驗組之外并被人道安le死。

2. 如何提高腫瘤成瘤的重復率：動物品系、性別、腫瘤細胞的來源、傳代次數(shù)、注射細胞的數(shù)量以及注射位置，以上幾個方面重點關(guān)注。