收到細胞后,檢查外包裝是否完整,細胞培養(yǎng)瓶是否完好。 如有破損漏液等問題,請即時聯(lián)系。
并進行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部。
2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3. 預熱培養(yǎng)基(含10%胎牛血清,1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5. ①若細胞密度較小,無菌操作,去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細胞密度達到80%以上,進行傳代
②若細胞密度較大,達到80%以上,將細胞傳代培養(yǎng)。 注:培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基。由于運輸過程中的問題,細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況。 這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的培養(yǎng)基。(這里是針對原來培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況,如果原來FBS濃度是20%,可以增加到25%FBS濃度)
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