手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
堿性磷酸酶顯色試劑盒檢測原理
產(chǎn)品描述：
本試劑盒應(yīng)用于胚胎干細胞（ES）和誘導(dǎo)多功能干細胞（iPS）的鑒定，以及免疫組化、免疫印跡等實驗中的堿性磷酸酶顯色。試劑盒內(nèi)的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽（BCIP）/硝基四氮唑藍（NBT）是堿性磷酸酶（AP）的常用底物之一，BCIP在AP的催化下會被水解生成強反應(yīng)性產(chǎn)物，后者與硝基四氮唑藍（NBT）反應(yīng)生成不溶性產(chǎn)物，使之呈現(xiàn)深藍色至藍紫色。
操作指南:
1. AP顯色工作液的配制：
取20μl 150×NBT溶液加入到3ml堿性磷酸酶顯色反應(yīng)緩沖液，充分混合均勻，再加入30μl 100×BCIP溶液，配置成工作液，如需改變工作液體積，可按相同比例適量配制。1h內(nèi)使用。
2. 顯色步驟:
a) 檢測細胞的內(nèi)源性堿性磷酸酶：吸出培養(yǎng)基，PBS潤洗3次，加入4％多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液，使用TBST清洗三次，加入顯色工作液，室溫避光孵育5-30分鐘，顯色至預(yù)期深淺后，用PBS潤洗1次，然后保存于PBS溶液中，顯微鏡下觀察結(jié)果。
b) 檢測組織切片或膜上結(jié)合的堿性磷酸酶抗體：使用洗滌液洗滌完后，加入適量工作液，保證完-全覆蓋樣品表面，室溫避光孵育5-30分鐘，顯色至預(yù)期深淺后，去除工作液，用蒸餾水清洗1-2次終止顯色反應(yīng)。
注意事項：
工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液在一定時間內(nèi)有效。
使用NBT時請采取必要的防護措施。
工作液用量必需充足，保證覆蓋組織片或印跡膜。
為獲得最佳實驗結(jié)果，請務(wù)必優(yōu)化如樣品使用量、抗體稀釋度、孵育時間等實驗條件。
綜上所述，BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒是一種功能強大、應(yīng)用廣泛的科研工具，能夠幫助科研工作者準確、快速地檢測和分析堿性磷酸酶的活性。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心