胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)界的“香餑餑”，備受胞胞們的“寵愛”，其實還有一個“香煎餅”，大家可知道？對一些細(xì)胞的特殊實驗研究，透析胎牛血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香”。

透析胎牛血清(abs945)

透析法處理血清是去除了分子質(zhì)量小于10kDa的小分子，避免外源小分子對細(xì)胞產(chǎn)生干擾。10kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細(xì)胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子等。適合脈沖示蹤實驗（例如同位素標(biāo)記特定小分子，并加入到培養(yǎng)體系中，以研究細(xì)胞代謝），也適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選等應(yīng)用。是研究蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞信號傳導(dǎo)和報告基因分析、報告基因細(xì)胞系篩選的很好工具，接下來我們了解一下具體應(yīng)用。

1、小分子標(biāo)記實驗

該實驗是將用同位素標(biāo)記的小分子如核苷酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的DNA，一般培養(yǎng)一段時間，細(xì)胞中的DNA將都被同位素標(biāo)記，然后進行DNA提取，純化等實驗分析。為避免胎牛血清中天然核苷酸的干擾，這時就需要用到透析胎牛血清，以保證摻入細(xì)胞DNA中的核苷酸均為標(biāo)記核苷酸。

小分子標(biāo)記實驗示例

2、陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選

一些有基因缺陷的細(xì)胞株如CHO-DFGRˉ，缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)，必須在添加了次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養(yǎng)液中才能存活?？蓪⑽覀兿胍磉_的目的基因和DHFR基因構(gòu)建質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用不含上述添加劑的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。未轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的缺陷細(xì)胞會凋亡；成功轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞會存活下來，形成細(xì)胞克隆。為避免胎牛血清中次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的干擾，這時就需要用到透析胎牛血清，以保證wan全培養(yǎng)液中不含次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸。

陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆的篩選示例

3、細(xì)胞平臺藥物篩選

細(xì)胞水平藥物篩選是更接近生理條件的一種藥物篩選模型，其模型是擬設(shè)計藥物作用的靶細(xì)胞，應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲取所需細(xì)胞，將這些細(xì)胞與候選化合物相互作用，通過與生化水平篩選類似的檢測技術(shù)測定化合物的作用能力，從而對化合物進行篩選。在藥物篩選過程中，未避免外源性的小分子對實驗的干擾，就需要用到透析胎牛血清。

細(xì)胞平臺藥物篩選示例

本期講解就到這里了，如有細(xì)胞培養(yǎng)問題，歡迎一起交流。

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