聚蛋白聚糖酶-1(ADAMTS-4,也稱為軟骨素酶-1)是解整合素和金屬蛋白酶家族(ADAMTS)的重要成員,主要參與軟骨素的降解。軟骨素是軟骨的主要結(jié)構(gòu)成分,而ADAMTS-4在骨關(guān)節(jié)炎(OA)軟骨的退化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此,檢測ADAMTS-4的活性對于研究骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制以及開發(fā)相關(guān)治療藥物具有重要意義。
SensoLyte 520聚蛋白聚糖酶-1活性檢測試劑盒是一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理的檢測試劑盒,專用于連續(xù)測量ADAMTS-4的酶活性。該試劑盒采用5-FAM作為熒光團(tuán),TAMRA作為猝滅劑的FRET肽底物。在完整的FRET肽中,5-FAM的熒光被TAMRA猝滅;當(dāng)ADAMTS-4切割FRET肽時,5-FAM的熒光得以恢復(fù),并可在激發(fā)/發(fā)射波長為490 nm/520 nm處連續(xù)監(jiān)測。熒光強度的增加與ADAMTS-4的活性呈正相關(guān),且由于其較長的發(fā)射波長,該底物受測試化合物自身熒光的干擾較小。
艾美捷SensoLyte 520聚蛋白聚糖酶-1活性檢測試劑盒:
貨號:AS-72114
吸收波長(nm):490
發(fā)射波長(nm):520
儲存條件:所有組分均需在-20°C下保存。組分A和B需避光并防潮。組分C和E可在室溫下保存以便于使用。
應(yīng)用:
熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)
蛋白酶活性檢測
生物標(biāo)志物靶點:ADAMTS-4(軟骨素酶)
檢測方法:熒光法
檢測下限:0.1 ng/ml
研究領(lǐng)域:細(xì)胞黏附與細(xì)胞外基質(zhì)
子研究領(lǐng)域:細(xì)胞黏附蛋白
用途:僅限研究使用
試劑盒組成:
組分A:5-FAM/5-TAMRA,軟骨素酶-1底物,激發(fā)/發(fā)射波長=490 nm/520 nm:60 µL
組分B:5-FAM,熒光參考標(biāo)準(zhǔn)品,激發(fā)/發(fā)射波長=490 nm/520 nm:1 mM,10 µL
組分C:檢測緩沖液:20 mL
組分D:對照抑制劑:100 µM,10 µL
組分E:終止液:10 mL
優(yōu)勢與特點
高靈敏度:熒光法檢測,靈敏度高,檢測下限低至0.1 ng/ml。
特異性高:基于FRET原理,特異性檢測ADAMTS-4活性,背景干擾低。
操作簡便:采用96孔板格式,適合高通量篩選。
穩(wěn)定性好:試劑盒組分在-20°C下保存,有效期長達(dá)2年。
實驗結(jié)果示例
在一項實驗中,使用該試劑盒檢測A549細(xì)胞裂解液中的Phospho-p38,結(jié)果顯示FRET底物被ADAMTS-4切割后,5-FAM熒光顯著增加,表明試劑盒能夠有效檢測ADAMTS-4的活性。
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