材料和設(shè)備

• 細(xì)胞：你想要培養(yǎng)的細(xì)胞系或原代細(xì)胞。
• 培養(yǎng)基：適合你細(xì)胞類型的培養(yǎng)基，包含必要的營養(yǎng)物質(zhì)和血清。
• 玻片：通常使用蓋玻片或?qū)ｉT的細(xì)胞培養(yǎng)玻片。
• 細(xì)胞培養(yǎng)皿：用于培養(yǎng)細(xì)胞的容器。
• 顯微鏡：用于觀察細(xì)胞。
• 移液器和移液管：用于精確移液。
• 無菌操作臺(tái)：用于無菌操作。
• 培養(yǎng)箱：通常為37°C，5% CO?的環(huán)境。

步驟

1. 準(zhǔn)備玻片：
• 清潔玻片：使用酒精或其他適當(dāng)?shù)那鍧崉┣鍧嵅Ｆ_保無塵無菌。
• 消毒玻片：將玻片放入70%酒精中浸泡，然后在無菌操作臺(tái)中晾干。
• 處理玻片（可選）：某些細(xì)胞可能需要玻片表面進(jìn)行處理以促進(jìn)細(xì)胞附著，如使用膠原蛋白或明膠涂層。
2. 細(xì)胞準(zhǔn)備：
• 從培養(yǎng)瓶或冷凍保存中取出細(xì)胞，并在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中復(fù)蘇。
• 通過離心或胰蛋白酶消化收集細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液。
• 計(jì)數(shù)細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液的濃度。
3. 種植細(xì)胞：
• 將適量的細(xì)胞懸液（通常為幾百微升到幾毫升，具體取決于細(xì)胞密度和玻片大小）加入到培養(yǎng)皿中。
• 將處理過的玻片輕輕放入培養(yǎng)皿中，確保玻片表面與細(xì)胞懸液接觸。
• 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使細(xì)胞均勻分布。
4. 培養(yǎng)：
• 將培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中，通常在37°C，5% CO?的環(huán)境中培養(yǎng)。
• 根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求，培養(yǎng)時(shí)間可以從幾小時(shí)到幾天不等。
5. 觀察和維護(hù)：
• 定期使用顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。
• 根據(jù)需要更換培養(yǎng)基，以保持細(xì)胞的健康生長(zhǎng)。
• 如果細(xì)胞過度生長(zhǎng)，可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

• 無菌操作：在整個(gè)過程中，確保所有操作都在無菌條件下進(jìn)行，以防止污染。
• 細(xì)胞密度：根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)整細(xì)胞種植的密度。
• 玻片處理：某些細(xì)胞可能需要特定的玻片表面處理以促進(jìn)附著和生長(zhǎng)。
• 培養(yǎng)條件：根據(jù)細(xì)胞類型，調(diào)整培養(yǎng)箱的溫度和CO?濃度。