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高通量DSF快速分析熱穩(wěn)定性Tm方法在單抗NISTab中的應(yīng)用
NISTmAb是一種廣泛表征的單克隆抗體，旨在用作開發(fā)**蛋白表征新技術(shù)中的標(biāo)樣。在本應(yīng)用文獻(xiàn)中，我們使用SUPR-DSF來獲取NISTmAb的差示掃描熒光法DSE)的教話，開洛結(jié)果與壽示掃描量熱法DSO進(jìn)行比較。SUPR-DSE解折了NISTAb所有的二個(gè)結(jié)構(gòu)域：CH2(690C.CH3(830()和高解特汽度的FAB結(jié)構(gòu)域(94oC)[1]。此外，所測(cè)得的Tm值與文獻(xiàn)的報(bào)道一致。這些結(jié)果證明了，應(yīng)用SUPR-DSF可以輕松獲得高質(zhì)量的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性信息。
結(jié)論：
Protein Stable公司的SUPR-DSF可以通過檢測(cè)蛋白質(zhì)內(nèi)源熒光的峰位移，并快速準(zhǔn)確地測(cè)量解鏈溫度。結(jié)果表明SUPR-DSF能夠獲得準(zhǔn)確的解鏈溫度，包括像Fab結(jié)構(gòu)域這樣的超高解鏈溫度(94 0C)。這也驗(yàn)證了基于內(nèi)源熒光法的SUPR-DSF可以獲得與DSC一致的結(jié)果。利用384孔板進(jìn)行測(cè)試的優(yōu)勢(shì)在于提高了通量，增加了便利性同時(shí)降低了樣品的消耗。
方法：
濃度為1mg/ml的NISTmAb在pH6的L-組氨酸緩中液中進(jìn)行配制，分別加到384孔LPCR微孔板中，每個(gè)孔用量是104L。分裝后，將微孔板離心60秒后，用透明膠膜密封。將SUPR-DSF中的連續(xù)升混程序設(shè)置成以每分鐘10C的升溫速率測(cè)量150C到105oC的熒光光道，熒光光譜所獲得的數(shù)據(jù)，通過BCM方法進(jìn)行計(jì)算處理，并量化光譜偏移。BCM的數(shù)據(jù)會(huì)處理成溫度的函數(shù)，并轉(zhuǎn)換成一階導(dǎo)數(shù)再進(jìn)行分析。根據(jù)導(dǎo)數(shù)的峰值計(jì)算解鏈溫度。所有樣品的方法和結(jié)果均可獲取。
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