已知，凡是能造成生物機體體溫上升的物質(zhì)均可稱為熱原（Pyrogen），其來源可能多樣化。而細菌內(nèi)毒素（Endotoxin）是熱原的一種，它是細菌性感染的一個重要致病因素。

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌菌體中存在的毒性物質(zhì)總稱，為多種革蘭氏陰性菌細胞壁上的teyou結(jié)構(gòu)。細菌內(nèi)毒素主要由磷脂、脂蛋白和脂多糖（LPS）組成，其中脂多糖（LPS）是天然或?qū)嶒炇抑苽涞膬?nèi)毒素復合物的生物活性部分，發(fā)揮毒性作用的是類脂質(zhì)A（Lipid A）。不同革蘭氏陰性菌的脂質(zhì)A結(jié)構(gòu)基本相似，所以由此類細菌引起的感染導致的毒性效應(yīng)大致相同，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。細菌在存活狀態(tài)時不會釋放內(nèi)毒素，但當細菌死亡裂解或者自溶后，內(nèi)毒素會被大量釋放出來。

圖1.革蘭氏陰性菌結(jié)構(gòu)圖

細菌內(nèi)毒素耐熱性和化學穩(wěn)定性很強，一般的方法很難將其去除或滅活，如：常規(guī)高壓滅菌法也不能將內(nèi)毒素chedi清除，一般的化學藥品也不會影響細菌內(nèi)毒素的活性，只有強酸、強堿或強氧化劑可以破壞其結(jié)構(gòu)。但內(nèi)毒素具有水溶性，生產(chǎn)中可用無熱原水沖洗以除去熱原；其還具有被吸附性，可用活性碳將其吸附。

細菌內(nèi)毒素是目前最危險和最常見的致熱污染物之一，主要原因為：它在自然界中無處不在（革蘭氏陰性菌即使在干凈的水中也能繁殖）、毒性強、在jiduan條件下也很穩(wěn)定、生產(chǎn)過程中很容易引入。對于日常的生命科學實驗，使用細菌制備的質(zhì)粒DNA和重組蛋白中都會有內(nèi)毒素的殘留，而且很難去除干凈，進而對后續(xù)實驗帶來潛在毒性影響。內(nèi)毒素的主要成分脂多糖有強烈的免疫活性和細胞毒性并產(chǎn)生復雜的細胞生物學效應(yīng)，因此大多數(shù)情況下會明顯干擾并產(chǎn)生不可預(yù)測的實驗結(jié)果。對生物系統(tǒng)，當人（或動物）體血液系統(tǒng)的輸入液中混入微量的細菌內(nèi)毒素時，可激活組織內(nèi)的炎性細胞和炎癥因子，導致機體發(fā)熱并產(chǎn)生全身性炎癥反應(yīng)，在很短時間內(nèi)將會使人產(chǎn)生昏迷和高燒，若不及時搶救，很可能危及生命。

因此，無論是用于生命科學研究的可能含有內(nèi)毒素的相關(guān)試劑，還是用于人和動物預(yù)防或治療的化學藥品、抗生素、生物制品等的原輔料、中間品和放行產(chǎn)品均需要進行內(nèi)毒素檢測，以確保有效性和安全性。

從20世紀開始，內(nèi)毒素檢測方法相繼出現(xiàn)。

鑒于上述情況，國內(nèi)外藥典法規(guī)也提出了一些新的內(nèi)毒素檢測方法。如：2020版《中國藥典》（四部）9251章節(jié)中提到可以采用重組C因子法檢測細菌內(nèi)毒素（C因子是鱟試劑中對細菌內(nèi)毒素敏感的蛋白，能夠選擇性識別內(nèi)毒素）。美國藥典(USP)專家委員會也已于2024年7月26日批準將USP<86>Bacterial Endotoxins Test Using Recombinant Reagents納入《美國藥典-國家處方集》，USP<86>章節(jié)于2024年11月發(fā)布，并于2025年5月正式生效。重組C因子法(rFc)通過重組方法產(chǎn)生C因子，具有：C因子來源穩(wěn)定，受批次影響??；操作簡單快速；更強的抗干擾能力（不受β-glucans影響）；專屬性好等優(yōu)點。該方法也有其缺點，主要為來源于不同品質(zhì)鱟血蛋白序列的重組蛋白對內(nèi)毒素的反應(yīng)性可能不同。

圖2.中外法規(guī)里列舉的內(nèi)毒素檢測方法

2020版《中國藥典》（三部）針對細菌內(nèi)毒素檢測，收錄了包括凝膠法和光度法在內(nèi)的共6種細菌內(nèi)毒素檢查方法。

凝膠法和光度法等都需要從海洋節(jié)肢動物鱟中取鱟血作為原料，而鱟目前已呈瀕?，F(xiàn)狀，亟需尋求替代方法。2020版《中國藥典》（四部）9251章節(jié)中提到可以采用重組C因子法檢測細菌內(nèi)毒素。此外，美國、歐洲和日本藥典也都提到可以采用重組C因子法檢測細菌內(nèi)毒素。

表1.各種內(nèi)毒素檢測方法介紹

目前，行業(yè)內(nèi)對于內(nèi)毒素的檢測，雖然仍以鱟試劑方法為主，但也逐漸接受重組C因子的檢測方法。為此，翌圣生物自主研發(fā)了重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒。

本試劑盒通過基因重組的方式表達C因子，然后重組C因子被待測樣本中的細菌內(nèi)毒素激活，進而酶切水解熒光底物，產(chǎn)生與內(nèi)毒素濃度成比例的熒光信號，根據(jù)熒光信號值檢測內(nèi)毒素含量。本試劑盒可以用于人類疾病治療的注射藥物（如化學藥品、抗生素、生物制品等）和醫(yī)療器械（包括透析液、植入式器械等）的原輔料、研發(fā)和生產(chǎn)工藝過程以及商業(yè)化進程中的內(nèi)毒素檢測。

試劑盒檢測范圍為0.005~5EU/mL，R2=0.9968，各濃度檢測值CV≤10%。

圖3.重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒標準曲線

該重組C因子內(nèi)毒素檢測試劑盒不受鱟試劑中β葡聚糖的干擾，避免了因β-葡聚糖引起的假陽性/結(jié)果不準確情況。

表2.不同內(nèi)毒素檢測方法數(shù)據(jù)對比