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C18反相色譜柱的全稱為C18色譜柱，其填料表面被修飾為含有18個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈烷基（即C18烷基鏈），具有非極性性質(zhì)。這種結(jié)構(gòu)使得C18色譜柱在反相色譜中具有優(yōu)異的分離性能。反相色譜柱通常采用非極性的載體（如硅膠）和偏極性的流動(dòng)相（通常包含有機(jī)溶劑和緩沖液）進(jìn)行分離。
C18反相色譜柱的工作原理基于C18烷基鏈與待分離物之間的相互作用。當(dāng)樣品進(jìn)入C18色譜柱時(shí)，非極性樣品成分會(huì)與C18表面發(fā)生較強(qiáng)的相互作用，從而在柱床中停留的時(shí)間較長(zhǎng)；而極性物質(zhì)與C18之間的相互作用較弱，因此在柱床中停留的時(shí)間較短。通過調(diào)節(jié)移動(dòng)相的組成、流速和溫度等條件，可以控制待分離物與C18填料的相互作用，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的分離和定量分析。
以下是C18反相色譜柱的操作事項(xiàng)：
1、使用前
檢查與準(zhǔn)備：取下柱頭保護(hù)塞，確保流體在柱內(nèi)順利流動(dòng)；檢查柱壓是否正常，若過高可能是柱子堵塞或雜質(zhì)沉積。
潤(rùn)洗與平衡：用合適的溶劑潤(rùn)洗，去除可能殘留的保護(hù)液或有機(jī)溶劑；然后用流動(dòng)相平衡，使柱內(nèi)溶劑體系穩(wěn)定，去除空氣，確保基線平穩(wěn)。
流動(dòng)相脫氣：使用脫氣后的流動(dòng)相進(jìn)行預(yù)處理和后續(xù)分析，避免氣泡影響柱效和泵故障。
溫度控制：確保色譜柱及其周圍環(huán)境維持在恒定溫度，減少因溫度變化引起的基線漂移和峰形變化。
2、使用中
流動(dòng)相選擇：pH值應(yīng)控制在2-8之間，以免損壞柱子；注意溶劑的互溶性，防止發(fā)生鹽析現(xiàn)象；若流動(dòng)相中有鹽類，先用水充分清洗，若是胺類添加到流動(dòng)相中，要用特定混合溶劑沖洗。
樣品處理：樣品溶液需經(jīng)適當(dāng)?shù)那疤幚砑斑^濾，以減少柱污染和堵塞；確認(rèn)所選樣品溶劑極性與運(yùn)行條件一致，通常應(yīng)選擇與流動(dòng)相相互兼容的溶劑。
流速控制：根據(jù)柱內(nèi)徑選擇合適的流速，如內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min左右；避免流速過高導(dǎo)致柱壓過大，影響柱子壽命。
3、使用后
沖洗：完成分離分析后，及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)；如果樣品為離子型，需要用10CV以上的溶劑沖洗，確保無(wú)殘留。
保存：長(zhǎng)期閑置時(shí)，要將色譜柱徹d沖洗，建議沖洗10CV以上，保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液中。
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