大鼠白介素ELISA試劑盒操作注意事項
個人防護
手套和防護:試劑盒中的終止液是酸性的,操作時請記得戴手套,避免接觸皮膚和眼睛。如果不小心接觸到,立即用大量清水沖洗。
試劑保存
溫度控制:試劑盒要放在2~8℃的冰箱里保存,并在有效期內使用。
標準品保存:用不完的標準品,要么丟掉,要么分裝后放在-20~-80℃的冰箱里。
試劑回溫
室溫恢復:使用前,讓試劑在室溫下恢復30分鐘,并確保所有成分和樣品都充分混勻。
避免污染
一次性用品:實驗中使用一次性EP管、槍頭、封板膜和干凈的塑料容器,以避免交叉污染。
操作一致性
標準操作:實驗中,對標準品和樣本進行復孔檢測,并保持試劑加入順序一致。每次檢測都需要做標準曲線。
洗滌清楚
全部清洗:洗板時去除殘留液體,以獲得最佳結果。洗完后立即進行下一步,不要讓微孔板干掉。
避免氣泡
輕柔混勻:在重溶或混勻標準品時,要輕柔操作,避免產生氣泡。
顯色和終止
顯色底物:顯色底物添加前應無色,并避光保存。
終止液順序:終止液的添加順序應與顯色底物相同。添加后,底物顏色應從藍變黃。
樣本處理
去除沉淀:去除樣本中可見的沉淀,避免使用溶血或高血脂樣本,以免影響結果。
樣本稀釋
稀釋檢測:如果樣本中靶標物濃度過高,需要適當稀釋后再檢測。正式實驗前,先做預實驗確定稀釋倍數(shù)。
樣本稀釋小貼士
為什么要稀釋樣本?
如果樣本中目標物質的濃度太高,超過了測試范圍,就需要稀釋,以便準確測量。
稀釋到什么程度?
稀釋后,樣本信號應在標準曲線中間范圍內,以確保數(shù)據準確。
稀釋的小技巧
大倍數(shù)稀釋時,建議分步進行,比如先稀釋10倍,再從這個基礎上稀釋20倍,得到準確的200倍稀釋液。
取多少樣本?
取樣時,至少5微升,以減少操作誤差。
預實驗很重要
正式實驗前,先做小實驗,確定樣本需要稀釋的倍數(shù)。
稀釋操作要規(guī)范
特別是大倍數(shù)稀釋時,要規(guī)范操作,減少誤差。
稀釋后的樣本怎么保存?
稀釋后的樣本要妥善保存,避免反復凍融,防止蛋白質降解。建議分裝后放在-20℃或-70℃的冰箱里。
樣本預處理
不同類型的樣本需要不同的預處理方法,合適的預處理是確保實驗準確的關鍵。
稀釋液的選擇
稀釋樣本時,最好用和標準品一樣的稀釋液,以保持實驗條件一致。
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