關鍵詞：菌種復壯 純種分離 宿主復壯 病毒 寄生微生物 誘變 基因突變 淘汰 菌絲頂端分離 培養(yǎng)基 無菌操作

菌種復壯指通過淘汰衰老、死亡、變異的細胞來挑選具有優(yōu)良性狀的細胞，以此來恢復菌種原有優(yōu)良性狀和活力的過程。常用方法有純種分離法、宿主復壯法、誘變法、淘汰法等。針對不同類型的菌種和復壯目的，可以采用多種方法。

一、純種分離法

純種分離法是目前應用廣泛的菌種復壯方法之一，通過挑取單個性狀優(yōu)良的菌落并進行多次分離培養(yǎng)，以去除混雜在菌種中的衰老、死亡和變異的細胞，從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌種，以達到復壯的目的。

操作步驟如下：

1.準備：無菌環(huán)境下，在超凈工作臺上用無菌接種針或接種環(huán)從需要復壯的菌種中挑取一個性狀優(yōu)良的單菌落。

2.分離：在準備好的培養(yǎng)皿上劃線分離，注意劃線手法，確保成熟后的菌落便于后續(xù)挑選。操作結束后將培養(yǎng)皿放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)。

3.挑選：待菌落生長成熟后，于超凈工作臺上挑選外觀、顏色、形態(tài)優(yōu)良的菌落，進行下一次劃線分離。

4.重復操作：重復數(shù)次上述操作至分離出性狀優(yōu)良的純種菌落。

此外，純種分離法還包括稀釋平板法、涂布平板法等多種方式，可以根據(jù)菌種特性和實驗條件選擇適合的方法來達到復壯菌種的目的。

圖示為劃線分離法

二、宿主復壯法

宿主復壯法適用于病毒、立克次氏體等細胞內寄生的微生物。通過將待復壯的菌種接種到昆蟲或植物的宿主細胞內，利用宿主細胞內復雜的代謝環(huán)境，提高菌種的活力，從而達到復壯的目的。

操作步驟如下：

1.準備：準備昆蟲或植物的宿主細胞，在無菌條件下將宿主細胞接種到適宜的培養(yǎng)基上。

2.寄生：將病毒等需要復壯的微生物接種到宿主細胞內，使其寄生并感染宿主細胞。

3.挑選：培養(yǎng)一段時間后，觀察宿主細胞的病變程度，從病變程度嚴重或已病死的宿主細胞內分離出典型菌株再次感染健康的宿主細胞。

4. 重復操作：重復上述操作至菌種活力得到提高。

圖示為病毒寄生宿主細胞

三、誘變法

通過物理或化學因素使菌種發(fā)生基因突變，從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌株。誘變法存在一定的風險，可能會導致菌種發(fā)生不可逆的突變，使用時需注意誘變劑的劑量或輻射時間。

操作步驟如下：

1.準備：準備好需要復壯的菌種培養(yǎng)基，選擇合適的誘變劑，如紫外線、抗生素等。

2.誘變：使用誘變劑處理培養(yǎng)基，使菌種發(fā)生基因突變。

3.挑選：將培養(yǎng)基放在適宜的環(huán)境中至培養(yǎng)結束，無菌環(huán)境下挑選出具有優(yōu)良性狀的突變株進行復壯。

圖示為用紫外線處理培養(yǎng)皿

四、淘汰法

淘汰法通過對衰退的菌種進行處理，如高溫、低溫的培養(yǎng)環(huán)境，低營養(yǎng)的培養(yǎng)基等，淘汰菌種中的衰老、死亡和變異的細胞，從而篩選出適應力強、有活力的細胞。淘汰法可以有效去除衰退個體，增強菌種的優(yōu)良性狀。

操作步驟如下：

1.準備：無菌環(huán)境下，將待復壯的菌種接種到低營養(yǎng)的培養(yǎng)基上，或接種到正常的培養(yǎng)基上放在高溫或低溫環(huán)境中培養(yǎng)。

2.挑選：培養(yǎng)周期結束后，在超凈工作臺上挑選出適應力強、有活力的菌落進行下一步的復壯操作。

圖示為通過調節(jié)溫度改變培養(yǎng)環(huán)境

五、其他方法

1.菌絲頂端分離：無菌環(huán)境下挑取健壯菌絲體的頂端部分進行純化培養(yǎng)，以恢復菌種原有的優(yōu)良性狀。此方法適用于不產(chǎn)孢子的絲狀菌。

2.適當更換培養(yǎng)基：在菌種傳代培養(yǎng)中適當改變培養(yǎng)基成分，以刺激菌絲生長，提高菌種活力。

3.定期進行菌種分離：對生產(chǎn)中應用的菌種每1-2年進行一次分離復壯，以保持菌種的優(yōu)良性狀和活力。

六、注意事項

1.復壯前需對菌種進行鑒定，保證菌種的純度。

2.復壯操作過程中要注意無菌操作，避免培養(yǎng)基或菌種被雜菌污染，保證菌種正常生長。

3.應對復壯后的菌種進行性能評價，確保其具有穩(wěn)定的優(yōu)良性狀。

綜上所述，菌種復壯是一個綜合性的過程，需要根據(jù)具體情況選擇合適的方法并按操作規(guī)范嚴格執(zhí)行。通過菌種復壯，可以恢復菌種原有的生命活力，提高菌種的生長和代謝速度，為發(fā)酵生產(chǎn)、科學研究等提供具有優(yōu)良性狀的菌種。