在做轉(zhuǎn)染，效果很好，用的也是LIPOFECTAMINE 2000，每次都是一次成功的。有以下幾個(gè)建議：

1.細(xì)胞的狀態(tài)。這點(diǎn)非常重要，不要急于求成，一定要讓細(xì)胞處于*的生長(zhǎng)狀態(tài)再做。個(gè)人覺得細(xì)胞復(fù)蘇后的3代左右細(xì)胞狀態(tài)，不要用傳了很多代的細(xì)胞去做，細(xì)胞的形態(tài)都會(huì)發(fā)生變化了。

2.細(xì)胞的融合度。說明書上寫的細(xì)胞的融合度要達(dá)到90%才能做啊，你的才70%，細(xì)胞太少，肯定容易死的。我的接種密度是3~4*105/ml.

3.無血清培養(yǎng)基OPTI-MEM（GIBICO）很好用，有無血清培養(yǎng)基的話，就用它代替PBS洗細(xì)胞兩遍。注意洗的時(shí)候要輕，靠邊緣加入液體，然后不要吹吸細(xì)胞，而是轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)板讓液體滾動(dòng)在細(xì)胞表面。如果洗的太厲害，細(xì)胞又損失一部分，當(dāng)然加了脂質(zhì)體，細(xì)胞受影響就更大了。

4.加入無血清培養(yǎng)基后5~6小時(shí)更換全培養(yǎng)基。18小時(shí)毒性時(shí)間太長(zhǎng)了！

5.轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒一定純度好、濃度高、無內(nèi)毒素。濃度不要低于0.35ug/ul。

用的是invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000，以下是以6孔板為例說明一下我的體系吧！

溶液1：240ul 無血清培養(yǎng)基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well （總體積250 ul）（溫育5min）
溶液2：X ul 無血清培養(yǎng)基 + 4 ug 質(zhì)粒 per well（總體積250 ul）

將溶液1與溶液2混合，室溫下置20min。

無血清培養(yǎng)基沖洗細(xì)胞兩遍后加入2ml 無血清培養(yǎng)基。

將溶液1與溶液2的混合液逐滴加入孔中，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻。在37℃，5％的CO2中保溫24-72小時(shí)。

個(gè)人經(jīng)驗(yàn)：48小時(shí)mRNA表達(dá)zui高；72h蛋白表達(dá)zui高。