一提到細胞培養(yǎng)，這是多少實驗者的噩夢，簡直……說多了都是淚。

小編經(jīng)過軟磨硬泡終于從師兄師姐那里討到了細胞培養(yǎng)秘籍，今天就大方一回，分享給大家。

★ 血清與培養(yǎng)基的選擇

一般實驗血清的添加比例為10%，也可根據(jù)細胞狀態(tài)和生長速率適當增加或減少添加比例。

對于培養(yǎng)基，建議選擇商品化的，比較成熟，穩(wěn)定性也較好。

★ 培養(yǎng)瓶的選擇

目前商品化的細胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當回旋瓶蓋，保證CO₂能順利進入細胞培養(yǎng)瓶。

細胞培養(yǎng)過程中，對于適應能力強的腫瘤細胞，可在傳代3-4次后更換新的細胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細胞系如293T等細胞，建議每次傳代更換新的細胞培養(yǎng)瓶來保證細胞狀態(tài)。

★ 細胞傳代

傳代時通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

?  濕消化法：待細胞變圓，成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min，棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。

?  干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進行細胞傳代。

不同細胞的細胞間連接強度不一樣，消化時間不同；不同細胞的貼壁能力不同，消化時間不同；消化時應觀察細胞形態(tài)，避免因過度消化影響細胞活性。

★ 細胞凍存與復蘇

當細胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時，需及時大量的凍存。

細胞凍存密度通常為1-3×10⁶個/ml。通常4℃放置0.5h，-20℃放置2h，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

細胞復蘇38℃水浴不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中。

★ 污染防控

細胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和細胞系間交叉污染的防控。

實驗中需保持良好的操作習慣，所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。實驗室也需定期清潔與消毒。

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