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化學(xué)多肽修飾：PEG修飾多肽，多肽的熒光標(biāo)記
多肽修飾主要是肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)和側(cè)鏈基團(tuán)的修飾。通過(guò)修飾能夠改變肽類化合物的物理化學(xué)性質(zhì)，優(yōu)化其在體內(nèi)的有效利用。經(jīng)過(guò)修飾的多肽類藥物，能夠顯著降低免疫原性、減少毒負(fù)作用、增加水溶性、延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間、改變體內(nèi)分布狀況等等。目前多肽標(biāo)記及修飾的內(nèi)容非常多，廣泛應(yīng)用在多肽藥物，多肽生物學(xué)，多肽抗體以及多肽試劑的研究中。目前應(yīng)用廣泛的有：非放射性核素標(biāo)記（C13，H2），熒光標(biāo)記（FAM，F(xiàn)ITC），生物素標(biāo)記，磷酸化修飾等。
熒光標(biāo)記由于沒(méi)有放射性，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單。因此，目前在生物學(xué)研究中熒光標(biāo)記應(yīng)用非常廣泛，熒光標(biāo)記方法與熒光試劑的結(jié)構(gòu)有關(guān)系，對(duì)于有游離羧基的采用的方法與接肽反應(yīng)相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。但是對(duì)于FITC標(biāo)記，需要在連接FITC前，增加一個(gè)氨基己酸，避免在切割的過(guò)程中被TFA切割掉。
如何選擇合適的熒光標(biāo)記基團(tuán)取決于您的實(shí)驗(yàn)需求。
藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究基本分為體內(nèi)研究和體外研究?jī)纱箢悺?/span>
對(duì)于體內(nèi)研究，一般選擇發(fā)射波長(zhǎng)在650-900nm的熒光基團(tuán)，例如：ICG、Cy5.5和 Nile Blue。這是因?yàn)檫@類基團(tuán)所發(fā)出的熒光具有較好的組織穿透能力，受背景干擾較小(水、血紅蛋白和脫氧血紅蛋白一般都會(huì)產(chǎn)生背景干擾吸收，其區(qū)域在560nm左右)。
對(duì)于體外研究，發(fā)射波長(zhǎng)在400到600nm的熒光基團(tuán)最為常用，例如：AMC、FITC和TAMRA。
熒光標(biāo)記的多肽在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用是很廣泛的。例如：用Cy5.5標(biāo)記的目標(biāo)多肽研究對(duì) c-Met受體的綁定作用。有人設(shè)計(jì)含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP，其C端為GGGSC， C端Cys用 Cy5.5-Maleimide標(biāo)記其巰基側(cè)鏈。研究結(jié)果表明：上述Cy5.5-cMBP多肽與U87MG腫瘤細(xì)胞共孵24小時(shí)后，具有較高的癌細(xì)胞攝取值，其響應(yīng)濃度在納摩爾級(jí)別。多肽保存
為了防止或盡量減少多肽降解，請(qǐng)將多肽以凍干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小樣存放，以避免反復(fù)凍融。一份樣品融凍后未用完，應(yīng)扔掉。細(xì)菌降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩，所以請(qǐng)將肽溶于無(wú)菌水或肽溶液過(guò)濾除菌。
多肽保存方法建議
所有的凍干多肽產(chǎn)品可以在常溫下避光運(yùn)輸，并可以在室溫條件下保存幾天或者少于一個(gè)星期，多肽性狀是穩(wěn)定的。所有的凍干多肽產(chǎn)品，都必須保存在干燥低溫的條件下，以-20℃的低溫為佳，若有條件最好保存在-80℃以下，在這樣的條件下大多數(shù)多肽可存放1-2年。
當(dāng)需要使用多肽產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)在開(kāi)蓋之前將多肽產(chǎn)品升至室溫；對(duì)保存于-20℃的產(chǎn)品，該過(guò)程需要1h或更長(zhǎng)，因包裝大小而異。否則，當(dāng)打開(kāi)瓶蓋時(shí)，水氣進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致多肽凝縮而降低其穩(wěn)定性。一旦打開(kāi)，應(yīng)迅速稱量完畢，并立即密閉以免潮解，親水肽尤其應(yīng)注意。
對(duì)序列中含有Cys、Met、Try的易氧化多肽和含有Gln、Asn、Asp的易降解多肽，應(yīng)避免反復(fù)融凍，以免多肽被氧化和降解，因此建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少，用后棄去，不要保存。
對(duì)于暫時(shí)不用的多肽，不要以溶液的形式保存（即使在-80°C的條件下）。
相關(guān)產(chǎn)品
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