qPCR軟件報(bào)錯了？別慌，這篇文章會給你答案！

在運(yùn)行qPCR實(shí)驗(yàn)或分析數(shù)據(jù)時(shí)，有時(shí)候會遇到軟件報(bào)錯，小編在這里列舉了Applied Biosystems^TM 品牌儀器軟件的常見報(bào)錯，分析了可能的原因和解決辦法，如果您正在使用我們的儀器，希望本文能給您提供一些解決軟件報(bào)錯問題的思路。

一、通用報(bào)錯(多款機(jī)型軟件均可能出現(xiàn))

1. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯：java.lang.IIIegalArgumentException: One of the raw spectra is null。點(diǎn)擊OK接受后，擴(kuò)增曲線是空白(如圖stepone plus軟件)。

問題分析：

可能是單次數(shù)據(jù)異常，導(dǎo)致校正文件丟失。在軟件上點(diǎn)擊Analysis  > override calibration > Use another calibration file 下選擇同儀器相同類型實(shí)驗(yàn)文件做校正 ，重新分析后可以恢復(fù)正常數(shù)據(jù)。出現(xiàn)該報(bào)錯的原因可能是雙擊了start run, 或者分析/保存數(shù)據(jù)過程被中斷，例如分析/保存過程中關(guān)閉軟件或拔出U盤。

2. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯：Analysis cannot proceed: not enough sample definded（如圖stepone plus軟件，此報(bào)錯僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。

問題分析：

plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置sample信息，設(shè)置好sample信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。

3. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯：Analysis cannot proceed: not enough targets definded（如圖stepone plus軟件，此報(bào)錯僅限stepone，stepone plus，7300 plus，7500 v2.0以上版本軟件）。

問題分析：

plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置target信息，設(shè)置好target信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。

4. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯：Analysis failed due to: GExSession doesn't exist in context。點(diǎn)擊OK  接受后，擴(kuò)增曲線是空白（如圖stepone plus軟件）。

問題分析：

擴(kuò)增循環(huán)階段未采集信號，需要打開信號收集標(biāo)識。

5. 在多重反應(yīng)程序設(shè)置中，給樣品孔添加ROX作為reportor 的探針時(shí)，報(bào)錯：Dye "ROX" already used in passive reference（如圖Q5軟件）。

問題分析：

儀器默認(rèn)passive reference選擇ROX作為參比熒光，如果實(shí)驗(yàn)中ROX是作為探針的報(bào)告基團(tuán)，則需要將passive reference改成None，之后就可以在target設(shè)置中選擇ROX作為探針了。

6. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯：The selected file cannot be opened, cannot open the file because file contents are not recognized（如圖Q5軟件）。

問題分析：

可能的原因包括：

1. 通過導(dǎo)入文件(import plate setup)在實(shí)驗(yàn)中添加了重復(fù)的樣本，使用了相同的sample name，建議編輯樣品名稱時(shí)不要使用相同的sample name 命名樣品。

2. 實(shí)驗(yàn)名稱包含不合要求的字符，例如空格，括號等，建議實(shí)驗(yàn)名稱不要使用不符要求的字符。

3. 文件受損，數(shù)據(jù)不完整，建議儀器運(yùn)行過程中不要操作軟件。

4. 拷貝數(shù)據(jù)的U盤有故障，導(dǎo)致拷貝數(shù)據(jù)不完整，建議更換U盤重新拷貝數(shù)據(jù)。

問題分析：

實(shí)驗(yàn)中選擇的儀器類型與實(shí)際使用的儀器不符，需要到Setup界面重新修改為正確的儀器類型。

4. 程序設(shè)置報(bào)黃色提醒 "number of data collection points is not valid"

問題分析：

使用7500 v2.4版本軟件產(chǎn)生的數(shù)據(jù)與PTS軟件不兼容，可以將eds數(shù)據(jù)先用7500 v2.3的軟件打開，分析后保存，然后再導(dǎo)入PTS軟件。

問題分析：

plate setup步驟未給樣品孔設(shè)置target或者sample name信息，設(shè)置好target或者sample name信息后重新分析，數(shù)據(jù)可以恢復(fù)正常。

2. 運(yùn)行PTS實(shí)驗(yàn)報(bào)錯：Star run validation: The filter set has not been selected for following target: ROX(x4-m4)。

問題分析：

含melt curve的實(shí)驗(yàn)程序中，軟件默認(rèn)melt curve filter只選擇X1M1，PTS實(shí)驗(yàn)需要從軟件進(jìn)入Method-action-optical filter settings, 在melt curve filter選項(xiàng)中將x4m4選中（Q5也可以嘗試x1m3）。

3. 打開數(shù)據(jù)分析軟件報(bào)錯：Analysis failed due to insufficient data。

2. 打開數(shù)據(jù)點(diǎn)擊analyze分析軟件報(bào)錯：Cannot calculate Pure Dye Matrix。

問題分析：

熔解曲線程序設(shè)置錯誤，如下圖中數(shù)據(jù)誤刪掉了60度的步驟，設(shè)成了95度升溫到95.3度。建議使用SYBR Green染料法做實(shí)驗(yàn)時(shí)，不要修改熔解曲線步驟，使用儀器默認(rèn)程序即可。