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原子吸收光譜儀（CAAM-2001系列）、金屬套玻璃霧化器（WNA-系列）、氫化物發(fā)生器（WHG-103A型）、高性能空心陰極燈，電子天平、微波消解儀等以及各種實(shí)驗(yàn)室裝備儀器及耗材。：  84782259

氫化物發(fā)生原子吸收法測(cè)定血液頭發(fā)中痕量硒

在硒的生物化學(xué)作用被逐漸認(rèn)識(shí)的今天,要求提供的分析數(shù)據(jù).由于經(jīng)典的熒光光度法測(cè)定硒,條件比較苛刻,本文采用氫化物發(fā)生原子吸收法測(cè)定了人體、全血頭發(fā)樣品中硒的含量。在確定了儀器的*工作條件的基礎(chǔ)上,著重研究了測(cè)定全血,頭發(fā)樣品中硒的前處理方法及干擾試驗(yàn).本法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.5%,標(biāo)準(zhǔn)加入回收率在95.7~102%之間,適用于開展流行病學(xué)調(diào)查和臨床分析的研究.

實(shí)驗(yàn)部分

一  儀器及工作條件

原子吸收光譜儀

氫化物發(fā)生器（WHG-103A型）

金屬套玻璃霧化器（WNA-1型）

硒空心陰極燈

電熱石英管

波長(zhǎng)196.0nm,燈電流5mA,狹縫1.3nm,空氣流量1.00kg·cm^-2, 乙炔流量0.05kg· cm^-2 ,測(cè)量方式直示,計(jì)算方是用峰高,校準(zhǔn)曲線或標(biāo)準(zhǔn)加入方法曲線,計(jì)算時(shí)間13s,延遲時(shí)間0.5s,進(jìn)樣量3ml,載氣流速Ar100ml·min^-1 ,進(jìn)樣時(shí)間30s,反應(yīng)時(shí)間15s.

二 試劑                                                                   

硒（IV）標(biāo)準(zhǔn)貯備液:1000ug·ml^-1,由高純硒粉配置.硒中間標(biāo)準(zhǔn)溶液5ug·ml^-1.

硼氫化鉀:1.5%溶液中含有0.1%的氫氧化鈉,用時(shí)現(xiàn)配.

亞沸蒸餾水

三  試樣處理

準(zhǔn)確取0.20ml血液試樣或0.2000g頭發(fā)試樣于20ml（12mm）刻度石英試管中,加入2ml濃HNO3,放置過夜,次日在加入0.5mlHClO4,置于160ºC恒溫沙浴中加熱消化至溶液成呈淡黃色后（約4h）,加入1mlH2O2,繼續(xù)加熱消化至溶液清亮（約1h）取出,測(cè)定前用HCl（30%）溶液定容.

于試樣處理的同時(shí)制備試劑空白.

四  校準(zhǔn)曲線的繪制

校準(zhǔn)曲線

用微量定量取樣器吸取硒中間表準(zhǔn)溶液,0,10,30,50和70ul分別放入50ml量瓶中,用HCl（30%）溶液稀釋到刻度,獲得濃度分別為0,1.0,3.0,5.0和7.0ng·ml 硒的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液.

標(biāo)準(zhǔn)加入法曲線

移取10ml試樣+10mlHCl（30%）:10ml樣液+10ml 2ng·ml^-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液; 10ml樣液+10ml 10ng·ml^-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液; 10ml樣液+10ml 14ng·ml^-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液,制成均含HCL（30%）溶液的硒標(biāo)準(zhǔn)加入法系列溶液.

結(jié)果與討論

 一  試樣前處理方法的考察

試樣的前處理是至關(guān)重要的.目前測(cè)定硒的前處理方法普遍采用濕法消化,常用的分解裝置有高型燒杯,三角錐瓶,高壓分解坩鍋和配有回流冷凝器的凱氏燒杯.由于前兩種裝置分解式樣時(shí),使用的酸量較大,硒易揮發(fā)損失,而且這些方法得消化液均需要轉(zhuǎn)移定容,易引起較大的誤差.本法采用刻度石英試管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化還原體系,于160ºC恒溫沙浴中消化血液頭發(fā)試樣.由于石英試管上端能起到空氣的冷凝回流作用,因而試劑不易揮發(fā),試樣消化*.與配有冷凝管的燒瓶消化法比較,具有操作簡(jiǎn)單,試劑和式樣用量少,減少轉(zhuǎn)譯的誤差等優(yōu)點(diǎn).本法與水冷凝管的凱氏燒瓶消化法比較的結(jié)果見表1.

                  表1  分解方法的比較

* X: 硒的平均值     n: 測(cè)定次數(shù)      SD: 標(biāo)準(zhǔn)偏差    RSD:相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

二  常見共存例子的干擾試驗(yàn)

我們調(diào)查了存在于血液,頭發(fā)中的25種共存例子對(duì)痕量硒測(cè)定的干擾試驗(yàn),結(jié)果表明,下述離子（ug·ml^-1）不干擾5ng·ml^-1硒的測(cè)定:Ca（700）, Na 、Fe³⁺（500）, Mg、K（200）, Cu、Zn（5）,Ni、Mn、Al（1）, Cr⁶⁺、Co（0.2）, Mo、As³⁺、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn²⁺ （0.1）,Si、Ba（0.5）,Pb（0.06）,Cd（0.05）以及NO3^-、ClO4^-、H2O2（0.5M）.

銻（Ⅲ）0.05 ug·ml^-1不干擾,含量≥0.1 ug·ml^-1有負(fù)干擾,但血液頭發(fā)中銻的含量一般都低于此值,再者經(jīng)過了相對(duì)的稀釋,它不會(huì)給本法測(cè)定硒帶來影響.當(dāng)HNO3、HClO4、H2O2的濃度小于0.5M

時(shí)也不干擾測(cè)定.原因是鹽酸介質(zhì)保持了較佳濃度,可是試樣中的Fe、Cu和Ni等重金屬元素形成絡(luò)合物避免其干擾^（1） ,這些與文獻(xiàn)^（3） ,報(bào)道是一致的.另外還采用低濃度硒的校準(zhǔn)曲線,使試樣中基體元素的濃度得到相對(duì)稀釋（100倍以上）,因而更有效地消除血液,頭發(fā)試樣中基體元素對(duì)測(cè)定硒的干擾.

三  校準(zhǔn)曲線法與標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果比較

在擬定的*條件下, 準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)加入法（圖1）,對(duì)試樣進(jìn)行了測(cè)試.實(shí)驗(yàn)表明,盡管血液,頭發(fā)試樣中含有較復(fù)雜的基體元素,但用上述兩種校準(zhǔn)曲線所求得硒的含量是一只的.

從圖1可以看出,三種校準(zhǔn)曲線的斜率基本相同,回歸分析后,相對(duì)系數(shù)均在0.9998以內(nèi).這也證明, 血液,頭發(fā)中的基體元素對(duì)硒的測(cè)定均無影響.

四  本法的回收率及精密度

在血液,頭發(fā)試樣中分別添加硒標(biāo)準(zhǔn),按試樣處理步驟處理后進(jìn)行測(cè)定,其回收結(jié)果見表2.五個(gè)平行樣品的測(cè)定,方法的精密度在1.2~4.8%以內(nèi).

經(jīng)過分析商業(yè)部食品檢測(cè)科學(xué)研究所提供的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW08551）豬肝中的硒含量,標(biāo)準(zhǔn)值為0.94+0.05 ug·g^-1 ,本法測(cè)定值為0.93+0.04 ug·g^-1 ,準(zhǔn)確度是令人滿意的.

表 2  硒的回收率

五  應(yīng)用

用本法測(cè)定人體全血（177例）頭發(fā)（327例）中硒的含量,其結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道值相近^（4~11） .結(jié)果見表3.

                表 3   人體全血,頭發(fā)硒平均水平

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