購買ELISA試劑盒時,很多客戶們會比較關(guān)心“質(zhì)量過關(guān)嗎”“壽命長久嗎”“精密度夠要求嗎”等相關(guān)問題。ELISA實(shí)驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定,包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋,按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。這些都是一些基礎(chǔ)知識,今天上海勁馬實(shí)驗設(shè)備有限公司帶您一起來看ELISA試劑盒操作技術(shù)常識分享:
試劑盒的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml??衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度,建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
注意事項
1.濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘
2.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
3.保存于2-8℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。
什么是ELISA試劑盒的回收率?是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標(biāo)液1PPM,就是1毫克/升,而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,就是說你的回收率是99%,這個與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測定,樣品水中含有無機(jī)氯20 mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測定時忽略體積變化,如果測定出樣品中無機(jī)氯為2.98mg/L,則認(rèn)為回收率為98%。
對于定量檢測來說,主要還是一個準(zhǔn)確度的驗證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好,所以就貼上去了。相對回收率可能會高于100%的,如果只是說“損失程度”,其實(shí)是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說,回收率越接近100%,說明這個試劑盒的準(zhǔn)確度越高。
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