很多剛接觸到elisa試劑盒實驗的新手,在做完實驗后反應(yīng)標準曲線梯度都不怎么好,zui近同濟大學(xué)的陳同學(xué)就遇到了這樣的問題,他在做人IL-6試劑盒實驗時標準曲線梯度就不好,就請求我司技術(shù)人員幫忙分析原因,經(jīng)過一番探討,我司給出以下可能的原因。
原因:
1、剛加完顯色劑時梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2、酶濃度太高,導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的
3、包被-酶標系統(tǒng)不匹配或者酶標的非特異反應(yīng)太強,或者酶標儀讀數(shù)范圍不夠,
4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。
5、建議:包被、酶標重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍
6、有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。
7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。
8、酶是自己標的這種情況的,HRP比例不要太高。
陳同學(xué)看后果然找到問題所在,特意打來感謝,對技術(shù)人員的耐心講解表示非常真誠的感謝,真心真意服務(wù)于科研工作者是我司職責(zé)所在,想要了解更多詳情,歡迎您的咨詢來電。
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