人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理，來檢測人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學診斷。
檢測范圍：0.5μg/L→15μg/L
規(guī)格：96T/盒
用途：用于人組織及相關液體樣本中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的水平。向預先包被了人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）單克隆抗體的酶標孔中加入腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF），溫育；洗滌后，加入HRP標記過的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的濃度呈正相關。
組成
1 標準品（24μg/L） 0.5ml 7 顯色劑A液 6ml
2 標準品稀釋液 3ml 8 顯色劑B液 6ml
3 酶標包被板 12孔×8條 9 終止液 6ml
4 酶標試劑 6ml 10 說明書 1份
5 30倍濃縮洗滌液 20ml 11 封板膜 2張
6 樣品稀釋液 6ml 12 密封袋 1個
需要而未提供的試劑和器材
1.標準規(guī)格酶標儀
2.7℃恒溫箱
3.一次性試管
4.吸水紙
5.精密移液器及一次性吸頭
6.蒸餾水
注意事項:
從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進行測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法
1.自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
2.手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
操作程序
1.標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
2.12μg/L （5號標準品） 120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
3.6μg/L （4號標準品） 120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
4.3μg/L （3號標準品） 120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
5.1.5μg/L （2號標準品） 120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
6.0.75μg/L （1號標準品） 120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
7.分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。
8.棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。
9.每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育30分鐘。
10.棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。
11.每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
12.取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
1.準備試劑，樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘
3.洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘
4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘
5.加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值,計算
保存:2-8℃
有效期:6個月。
