近日，國家藥典委員會擬修訂和公示關(guān)于《中國藥典》2015年版四部“0212藥材和飲片檢定通則”、“2341農(nóng)藥殘留量測定法修訂草案”。其中關(guān)于新增“第五法藥材及飲片(植物類)中禁用農(nóng)藥多殘留測定法”，以及在檢定通則中規(guī)定了33種禁用農(nóng)藥不得檢出，為藥材及飲片中農(nóng)藥殘留的測定提供技術(shù)保障和法規(guī)依據(jù)。
在第五法藥材及飲片(植物類)中禁用農(nóng)藥多殘留測定法征詢意見稿中，規(guī)定了三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)分析方法，用于 30 種農(nóng)藥的檢測分析。珀金埃爾默采用 QSight LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，建立了藥材及飲片中上述農(nóng)藥殘留分析的整體解決方案。
樣品前處理
根據(jù)樣品基質(zhì)的特點(diǎn)和方法確認(rèn)結(jié)果，參照《中國藥典》 “2341 農(nóng)藥殘留量測定法(新增第五法)公示稿 ”所列直接提取法、快速樣品處理法(QuEChERS)和固相萃取法(SPE)，選擇適宜的樣品制備方法。
LC-MS/MS儀器方法
PerkinElmer LX50 UHPLC 參數(shù)
色譜柱：Kinetex C18 色譜柱， 4.6 x 100 mm, 2.6 μm
柱溫：35℃
流速：0.8 mL/min
流動相及梯度：表 1
進(jìn)樣量：5 μL
表1. 30種農(nóng)藥化合物液相色譜梯度洗脫表
質(zhì)譜參數(shù)
以下參數(shù)以PerkinElmer QSight 210三重四極桿質(zhì)譜儀為例，目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2和表3。
表2. 30種農(nóng)藥化合物質(zhì)譜參數(shù)表(1)
表2. 30種農(nóng)藥化合物質(zhì)譜參數(shù)表(2)
表2. 30種農(nóng)藥化合物質(zhì)譜參數(shù)表(3)
表2. 30種農(nóng)藥化合物質(zhì)譜參數(shù)表(4)
表3. 質(zhì)譜離子源參數(shù)
檢測結(jié)果
圖1中展示了采用30種農(nóng)藥化合物濃度為10.0 µg/L的總離子流色譜圖，經(jīng)色譜條件優(yōu)化，各個化合物的峰型對稱，獲得優(yōu)異的色譜分離效果。
圖1. 30種農(nóng)藥化合物提取離子色譜圖(濃度為10 µg/L)
藥材及飲片中真菌毒素的液質(zhì)聯(lián)用檢測
黃曲霉毒素 (Aflatoxin) 是由黃曲霉，寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類分子結(jié)構(gòu)相似的次級代謝產(chǎn)物，是一類毒性和致癌性很強(qiáng)的化合物，為第一類致癌物，是人類原發(fā)性肝癌的主要致病因素之一。中藥材在生長和儲存過程中，環(huán)境條件不當(dāng)便會滋生霉菌從而產(chǎn)生黃曲霉毒素。2015 版《中國藥典》對柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠(yuǎn)志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片品種項(xiàng)下增加“黃曲霉毒素”檢查項(xiàng)目，限度為“黃曲霉毒素B1不得過5 μg/kg；黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2總量不得過10 μg/kg”。
藥典中已經(jīng)確定三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS) 分析方法為黃曲霉毒素的仲裁檢測方法。珀金埃爾默采用 QSight LC-MS/MS液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，建立了藥材及飲片中黃曲霉毒素含量測定整體解決方案。
樣品前處理方法
提取： 取供試品粉末約15 g(過二號篩)，精密稱定，加入氯化鈉 3 g，置于均質(zhì)瓶中，加入70%甲醇溶液75 mL，高速攪拌 2 分鐘(攪拌速度大于11000 轉(zhuǎn)/分)，離心 5 分鐘(離心速度2500 轉(zhuǎn)/分)，精密量取上清液 15 mL，置于 50 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22 μm)濾過，待凈化。
凈化：
(1)上樣：將準(zhǔn)確移取15.0 mL 樣品提取液注入免疫親和柱，調(diào)節(jié)空氣壓力泵的壓力使溶液以約6 mL /min 流速緩慢通過免疫親和柱，直至2 mL~3 mL 空氣通過柱體，隨后調(diào)節(jié)開關(guān)，使液體以1~2 d/s 的速度流出；
(2)淋洗：以10 mL 水淋洗免疫親和柱兩次，棄去全部流出液，并使2 mL~3 mL 空氣通過免疫親和柱，流速為2~3 d/s；
(3)洗脫：準(zhǔn)確加入1. 0 mL 色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min~2 mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
LC-MS/MS儀器方法
PerkinElmer LX50 UHPLC 參數(shù)
色譜柱：Brownlee SPP C18,100mm*2.1mm,2.7μm
柱溫：40 ℃ 流速：0.3 mL/min
進(jìn)樣量：10 μL
流動相及梯度：見表 4
表4. 4種黃曲霉毒素液相色譜梯度洗脫表
質(zhì)譜參數(shù)
以下參數(shù)以PerkinElmer QSight 210三重四極桿質(zhì)譜儀為例，目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見表5和表6。
表5. 4種黃曲霉毒素化合物質(zhì)譜參數(shù)表(*為定量離子對)
表6. 質(zhì)譜離子源參數(shù)
檢測結(jié)果
圖2中展示了采用4種黃曲霉毒素的提取離子流色譜圖，經(jīng)色譜條件優(yōu)化，各個化合物的峰型對稱，獲得優(yōu)異的色譜分離效果，圖3為4種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)曲線，表7為相關(guān)系數(shù)和檢出下限及重復(fù)性。
圖2. 4種黃曲霉毒素的提取離子流色譜圖
圖3. 4種黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
表7. 4種黃曲霉毒素的線性范圍、相關(guān)系數(shù)(R2)、LOQ及重現(xiàn)性數(shù)據(jù)
本文采用QSight LX50 UHPLC-QSightTM 210三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了快速，高靈敏度和可靠的LC-MS/MS實(shí)驗(yàn)方法測定中藥材及飲片中的農(nóng)藥化學(xué)品殘留和黃曲霉毒素。本方法具有分析速度快、靈敏度高等特點(diǎn)，適用于中藥質(zhì)檢部門對中藥材及飲片中農(nóng)藥化學(xué)品多殘留和黃曲霉毒素的定性定量分析。
圖4. *臺立式四極桿質(zhì)譜系統(tǒng) —— 珀金埃爾默 QSight 三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)
圖5. “不怕臟”的珀金埃爾默 QSight 三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)的優(yōu)勢設(shè)計(jì)
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