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細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：2045 發(fā)布時(shí)間：2008-1-17
細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù) |
細(xì)胞遺傳學(xué)一詞可追溯到一百多年前科學(xué)家在細(xì)胞核里發(fā)現(xiàn)染色體的時(shí)候。 “染色體"在希臘語里的意思是“帶色的體"。染色體顯帶技術(shù)的發(fā)展使科學(xué)家們能夠識別不同的染色體，從而在染色體水平上來了解許多疾病的遺傳變異。但是，細(xì)胞遺傳學(xué)研究也有它的不足之處。首先，受限于顯帶技術(shù)的分辨率（超過3Mb的DNA才能被識別），檢出象染色體微缺失綜合癥之類的微小染色體變異可能性很??；第二，傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳技術(shù)只能分析中期分裂相細(xì)胞。而且，許多腫瘤特別是實(shí)體，染色體重組非常復(fù)雜，無法通過顯帶分析方法得到全部染色體核型。 1998年以來，許多以FISH為基礎(chǔ)的技術(shù)發(fā)展起來，解決了許多傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)中存在的問題，并開辟了分子細(xì)胞遺傳學(xué)的新時(shí)代。 直到1996年，M-FISH技術(shù)才得以建立，也就是運(yùn)用幾種不同熒光染色將22對常染色體和2條性染色體著色染成24種不同的顏色組合（Schrock E,et al.,1996;Speicher MR,et al.,1996）。這項(xiàng)研究的原理是：將幾種熒光染料混合后所產(chǎn)生的顏色要多于所使用混合染料的數(shù)目。理論上，如果使用n種熒光染料，那么就可檢 測2n-1個(gè)目標(biāo)。因此，只用5種熒光染料就可標(biāo)記22對常染色體和2條性染色體。M-FISH就是使用這種方法來標(biāo)記探針，每條染色體被不同的熒光染料組合標(biāo)記。而且，這兩種技術(shù)也使用特殊的軟件來識別虛擬顏色代表的不同的熒光組合。M-FISH中，通過5個(gè)窄帶濾波器對5種不同的熒光圖像分別捕獲，然后對這5個(gè)圖像整合并用特定的軟件分析； 比較基因組雜交技術(shù)，可以在一次實(shí)驗(yàn)中分析整個(gè)基因組的DNA序列拷貝的數(shù)目變化（Kallioniemi A,etal.,1992）。將等量的被檢測組織和正常對照組織全基因組DNA分別用綠色或紅色熒光標(biāo)記，混合變性后與標(biāo)記探針和正常的分裂中期染色體雜交，雜交后對照各自的參考染色體分別計(jì)算和分析檢測組織和正常對照組織的熒光比率。此項(xiàng)技術(shù)可以有效地檢測染色體不平衡，例如缺失、重復(fù)。CGH也有缺點(diǎn),首先，該技術(shù)只能檢測非平衡的染色體重組，對平衡染色體重組卻無能為力；大部分CGH軟件有自動核型分析軟件包系統(tǒng)，但是需要一定程度的手動干預(yù)。另一個(gè)局限是分辨率低，一般只有大于10Mb的非平衡改變才能被檢測。對于高水平的擴(kuò)增，2Mb就可以被檢測。 盡管CGH可以用來分析組織樣本的細(xì)胞遺傳學(xué)變異，但由于分辨率低的關(guān)系，對于單個(gè)基因異常提供的信息有限。在這種情況下，間期FISH為檢測特定基因位點(diǎn)上的變異提供了選擇方法。因?yàn)槿旧|(zhì)在細(xì)胞核內(nèi)纏繞而難以變性。細(xì)胞分裂間期FISH的難度大于中期FISH。因此，間期FISH探針需信號強(qiáng)烈集且無背景信號產(chǎn)生，以避免判斷錯(cuò)誤。黏性質(zhì)粒，PAC、BAC可用于間期FISH,而YAC則因?yàn)樗陌袇^(qū)域太大會產(chǎn)生“成團(tuán)"信號而不適合使用。間期FISH廣泛應(yīng)用于臨床診斷中，尤其是對染色體核型分析失敗和遺傳學(xué)分析貌似正常的病例尤為有意義。 |