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技術(shù)文章

誘導(dǎo)動物細胞融合的方法

點擊次數(shù):4329 發(fā)布時間:2008-10-17

誘導(dǎo)動物細胞融合的方法

在體外培養(yǎng)條件下,動物細胞會自發(fā)融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導(dǎo)細胞融合效應(yīng)的生物或化學(xué)藥劑,或者采用電融合技術(shù),人為地促進細胞融合。

病毒誘導(dǎo)融合  病毒是zui早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒zui常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。

用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)細胞融合的

優(yōu)點:融合率較高,對各種動物細胞都適宜,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養(yǎng);

缺點:仙臺病毒不穩(wěn)定,在保存過程中融合活性會降低,并且制備過程比較煩瑣。此外,病毒引進細胞后,可能會對細胞的生命活動產(chǎn)生干擾。

聚乙二醇PEG誘導(dǎo)融合  聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,能夠有效地促進植物原生質(zhì)體和動物細胞的融合。在不同種類的動物細胞混合液中加入聚乙二醇,就會發(fā)生細胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過程中,就會發(fā)生細胞融合。聚乙二醇誘導(dǎo)細胞融合的機理,目前還不太清楚。聚乙二醇是化學(xué)試劑,使用起來很方便,誘導(dǎo)細胞融合的頻率比較高,但是它有一定毒性,對有些細胞(如卵細胞)不適用。

電融合  20世紀(jì)80年代建立起來的電融合技術(shù),是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場中,使細胞聚集成串珠狀,然后施加高壓電脈沖,以促使細胞融合。緊密排列的細胞,在相互接觸的細胞膜之間會出現(xiàn)無蛋白顆粒的脂質(zhì)區(qū),當(dāng)受到電擊時,這個區(qū)域就會被擊穿,產(chǎn)生脂雙層膜孔,導(dǎo)致細胞之間的細胞質(zhì)連通,進而發(fā)生細胞融合。電融合技術(shù)有許多優(yōu)點,如導(dǎo)細胞融合的頻率高,對細胞無毒害作用,操作簡便,可重復(fù)性好。

 

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