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你知道嗎？

我國每年約有30000兒童因藥物性致聾陷入無聲世界，其中因抗生素使用不當(dāng)致聾占了約一半。近年研究還發(fā)現(xiàn)，我國藥源性耳聾患者中50%與遺傳因素有關(guān)，而且屬“母系遺傳”，有家族史的患者應(yīng)禁用氨基糖苷類藥物。

氨基糖苷類抗生素藥

因價(jià)格低廉、抗菌譜廣等特點(diǎn)，也應(yīng)用于獸用藥殺菌以促進(jìn)家chu生長。此類抗生素由2個或多個氨基糖基團(tuán)通過糖苷和氨基環(huán)多醇鍵合而成，極性大，易溶于水，脂溶性差，人體和禽畜的胃腸道不易吸收，通過肌肉注射后大部分以原藥經(jīng)腎排泄，通過糞肥可能遷移至土壤及周圍水體中，終進(jìn)入食物鏈，對動物和人體健康及生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成潛在威脅。

氨基糖苷類抗生素藥分析檢測中的挑戰(zhàn)

由于此類化合物極性極大，常規(guī)色譜保留弱或無保留，無紫外吸收或紫外吸收弱，業(yè)內(nèi)目前也沒有特別成熟穩(wěn)定且靈敏的檢測方法。

Idea 1

對于極性化合物的檢測，一般會首先想到選用親水作用液相色譜-HILIC，理論上親水性越強(qiáng)的化合物，在Hilic柱上被保留的時(shí)間越長。市面上有兩款Hilic柱在極性化合物的保留能力方面頗受廣大科研工作者的青睞，但在進(jìn)行氨基糖苷類抗生素化合物分析檢測時(shí)，因基質(zhì)殘留大、穩(wěn)定性差、重現(xiàn)性不好、靈敏度不高等原因而未受認(rèn)可。

Idea 2

另外一個思路是在流動相中添加七氟丁酸（HFBA）、三氟乙suan（TFA）等離子對試劑來增強(qiáng)極性化合物的保留，GBT21323-2007《動物組織中氨基糖苷類藥物殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》中，使用100mM HFBA作為流動相，結(jié)合常規(guī)的C18柱，對這類化合物保留良好。

但是，TFA、HFBA等離子對試劑，負(fù)離子響應(yīng)*，進(jìn)到質(zhì)譜中極易殘留且不容易洗掉，影響其他負(fù)離子化合物的檢測靈敏度，質(zhì)譜分析中是不建議使用離子對試劑的。另外，國標(biāo)方法中，進(jìn)樣量大（30μL），基質(zhì)效應(yīng)明顯，其檢測的10種氨基糖類抗生素LOQ分別為50ppb、300ppb，靈敏度不高。

??檢測氨基糖苷，賽默飛有妙招！??

賽默飛氨基糖苷類抗生素(AGs)檢測方法包

賽默飛采用Thermo Scientific™ Vanquish™ Binary Horizon液相系統(tǒng)與Thermo Scientific™ TSQ Fortis™三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用平臺，通過在流動相中添加TFA和HFBA等離子對試劑，搭配Thermo Scientific™ Acclaim™ AmG C18 氨基糖苷類抗生素檢測的柱（可耐pH范圍0.5~10），來增強(qiáng)這些極性化合物的保留，再結(jié)合賽默飛離子色譜專li的電解再生膜抑制器技術(shù)，去掉TFA和HFBA離子，避免污染質(zhì)譜。

Vanquish™ Binary Horizon液相系統(tǒng)與TSQ Fortis™三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用平臺

基于這樣的理念和賽默飛*的技術(shù)平臺，成功建立了快速檢測動物源食品中14種氨基糖苷類抗生素殘留的方法（潮霉素、阿米卡星、安普霉素、巴龍霉素、卡那霉素、鏈霉素、奈替米星、慶大霉素、大觀霉素、雙氫鏈霉素、妥布霉素、新霉素、西索米星、依替米星）。

Acclaim™ AmG C18 氨基糖苷類抗生素檢測的柱

樣品前處理方式與國標(biāo)GBT21323-2007一致，21min內(nèi)獲得良好的分離（國標(biāo)35 min），靈敏度滿足國標(biāo)要求，LOQ均≤20ppb（進(jìn)樣量5μL）且連續(xù)6針的RSD均＜14%，連續(xù)進(jìn)50針豬肉基質(zhì)樣品后，保留時(shí)間精密度和峰面積重復(fù)性良好，RTs偏差≤±0.03min，各化合物50ppb的峰面積重復(fù)性均＜11%，本方案快速靈敏、可靠穩(wěn)定。

電解再生膜抑制器

部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)展示

14種氨基糖苷類抗生素在21min內(nèi)實(shí)現(xiàn)良好保留和分離。

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抑制器原理小貼士

在下圖抑制器原理圖中，兩邊是選擇性透過膜，中間為流動相通道，通過電解水作用，在陰極產(chǎn)生OH?置換出流動相中的TFA?和HFBA?，直接從陽極排到廢液。

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參考文獻(xiàn)

徐媛，陳達(dá)，鐘新林，徐牛生，LC-MSMS結(jié)合離子色譜電解再生膜抑制器技術(shù)快速檢測動物源食品中14種氨基糖苷類抗生素殘留