液相色譜柱后衍生法測(cè)定維生素B1

維生素B1又稱硫胺素，是人體生長(zhǎng)和發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，在食品和保健品中廣泛應(yīng)用，因此如何快速準(zhǔn)確的測(cè)定就顯得非常重要。維生素B1經(jīng)氧化后，與鐵KCN 在堿性條件下可以生成有熒光的物質(zhì)。本方法以此為依據(jù)，建立了液相色譜-柱后衍生法測(cè)定維生素B1。

1 材料和方法

1.1試劑

維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品，購自Sigma公司；無水醋酸鈉，冰醋酸，氫氧化鉀，水為屈臣氏蒸餾水，甲醇為色譜純。

0.05 mol/L醋酸鈉溶液（pH = 4.5）：稱取醋酸鈉4.10 g加水溶解，并用冰乙酸調(diào)節(jié)pH = 4.5，然后稀釋至1000 ml；

0.25 g/L堿性鐵KCN溶液（吸取10 g/L鐵KCN溶液5 ml用100 g/L的氫氧化鉀溶液稀釋至500 ml）。

1.2儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS3000自動(dòng)進(jìn)樣器，Lablliance Series 高壓泵，天津蘭博第三代 PCR3柱后衍生裝置，Varian9075熒光檢測(cè)器和Lablliance色譜工作站組成，配一支Kromasil C₁₈色譜柱(4.6 x 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱

1.3色譜條件

色譜柱：Kromasil C₁₈色譜柱(4.6 x 250 mm, 5 um)，天津蘭博實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；

流動(dòng)相：0.05 mol/L醋酸鈉溶液（pH=4.5）/甲醇=95/5；

流速：1.0 ml/min；

柱溫：室溫；

進(jìn)樣量：10 ul；

衍生劑：0.25 g/L堿性鐵KCN溶液；

流速：0.3 ml/min；

衍生溫度：室溫；

檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)375 nm，發(fā)射波長(zhǎng)435 nm。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 流動(dòng)相的選擇

根據(jù)維生素B1的性質(zhì)，優(yōu)化流動(dòng)相配比，選擇0.05 mol/L醋酸鈉溶液（pH=4.5）/甲醇=95/5為流動(dòng)相，標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖1所示。

2.2線性關(guān)系考察

稱取0.0500g 的維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水溶解并定容至100 ml，放于冰箱中備用。測(cè)定時(shí)將儲(chǔ)備液稀釋至濃度為10.0 ug/ml，過0.45um濾膜，配制標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.01、0.05、0.10、0.20、1.0、10.0 ug/ml。

結(jié)果表明在0.01到10.0 ug/ml濃度范圍內(nèi)，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，出峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程Y=7.46×10⁶X，r=0.9998，維生素B1有良好的線性關(guān)系。

2.3重現(xiàn)性考察

精密吸取濃度為0.05 ug/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 uL，進(jìn)液相色譜儀測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差，得維生素B1的RSD=1.8%。

3結(jié)論

本方法具有方便、準(zhǔn)確、靈敏度高、精密度好等優(yōu)點(diǎn)，且線性范圍寬, 重現(xiàn)性好，可以滿足日常分析需要。