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豬新發(fā)冠狀病毒N蛋白，豬新發(fā)冠狀蛋白，豬新發(fā)冠狀病毒抗原

豬δ冠狀病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCo V)是一種新興冠狀病毒,可引發(fā)仔豬的嘔吐、腹瀉、脫水,甚至死亡,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。PDCo V主要編碼的4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白是:纖突蛋白(spike,S)、核衣殼蛋白(nucleocapsid,N)、膜糖蛋白(membrane,M)、小膜蛋白(envelope,E)。其中,N蛋白在病毒RNA復(fù)制和產(chǎn)生過(guò)程中起重要作用,表達(dá)量大、保守性強(qiáng),常作為其他冠狀病毒檢測(cè)病毒抗體的診斷抗原。決定抗原特異性的分子基礎(chǔ)是抗原表位,通過(guò)對(duì)其進(jìn)行研究,有利于進(jìn)一步設(shè)計(jì)兼具有免疫活性和中和活性的多肽、新型診斷試劑和新型疫苗分子。鑒于此,本研究通過(guò)制備PDCo V N蛋白單克隆抗體并對(duì)抗原表位進(jìn)行篩選與鑒定,為PDCo V診斷方法和新型疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。為了獲取PDCo V N基因重組蛋白,本試驗(yàn)分別構(gòu)建了PDCo V NH毒株的N基因的p ET-32a和p GEX-6p-1原核表達(dá)載體,并分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,利用濃度為1 m M的IPTG對(duì)重組菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),進(jìn)一步對(duì)表達(dá)的PDCo V重組N蛋白進(jìn)行純化與鑒定。結(jié)果顯示,以PDCo V NH毒株病毒RNA為模板,通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增出約1 029 bp的N基因,與預(yù)期大小相符;SDS-PAGE電泳驗(yàn)證,結(jié)果顯示,PDCo V N基因在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得成功表達(dá),表達(dá)的重組N蛋白的分子量分別為56 k Da和64 k Da,與預(yù)期大小相符;Western blot結(jié)果中,純化后的蛋白可以特異性的與PDCo V陽(yáng)性血清發(fā)生反應(yīng),說(shuō)明其抗原性良好。以表達(dá)并純化得到的His-PDCo V-N為免疫原,免疫6~8周齡雌性BALB/c小鼠,共制備得到17株能特異性穩(wěn)定分泌抗PDCo V N蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為1G6、1F8、1E10、2G5、3A7、3F9、3E12、5D11、7B2、7E6、7G6、7F10、8E2、8D4、8E8、9G1、9G11?？贵w亞類鑒定顯示,3E12和9G11細(xì)胞株分泌的抗體亞類為Ig G2b型,其余15株均為Ig G1型,輕鏈均為κ鏈。

品牌：PhyCell/費(fèi)雪
規(guī)格：0.1mg,0.5mg,1mg
該抗原可應(yīng)用于ELISA、膠體金、免疫親和柱層析等免疫檢測(cè)。
蛋白載體:牛血清白蛋白/卵清白蛋白/匙孔血藍(lán)蛋白BSA/OVA/KLH
物理性狀：液體，避免反復(fù)凍融
來(lái) 源:Balb/c 小鼠
免疫層析效價(jià)： 1:40以上，偶聯(lián)比大于1:60
蛋白濃度：＞1mg/ml，具體視批次而定
緩沖液：0.01M PBS PH7.4無(wú)防腐劑
儲(chǔ)存條件：-20℃以下
穩(wěn) 定 性： 凍融一次復(fù)檢合格，有效期三年
本產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類、治療或診斷應(yīng)用。