賽默飛實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀LightCycler 480 II（Roche Diagnostics）是一款設(shè)計(jì)精良、實(shí)時(shí)PCR儀器，廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、基因突變檢測(cè)、微生物檢測(cè)等多個(gè)生命科學(xué)研究領(lǐng)域。作為一款高性能的定量PCR系統(tǒng)，LightCycler 480 II提供了高度可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和快速的數(shù)據(jù)處理能力，是生命科學(xué)研究中的工具之一。
以下為關(guān)于LightCycler 480 II的詳細(xì)介紹：
一、LightCycler 480 II簡(jiǎn)介
LightCycler 480 II由Roche Diagnostics公司研發(fā)并生產(chǎn)，基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-Time PCR）。該儀器采用了創(chuàng)新的光學(xué)和溫控技術(shù)，可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化，從而精確地定量檢測(cè)PCR反應(yīng)中的目標(biāo)DNA或RNA。其廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景包括基因表達(dá)分析、基因突變檢測(cè)、病原微生物檢測(cè)、藥物篩選等。
該設(shè)備結(jié)合了高通量和高精度，能夠滿足大規(guī)模實(shí)驗(yàn)的需求，并提供高度可靠和重復(fù)性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。LightCycler 480 II還提供強(qiáng)大的軟件支持，使得數(shù)據(jù)分析變得簡(jiǎn)單和高效。
二、主要特點(diǎn)
1. 高靈敏度和高精度
LightCycler 480 II具有出色的靈敏度，能夠檢測(cè)到低拷貝的DNA或RNA，確保對(duì)微小基因表達(dá)量變化的高精度監(jiān)測(cè)。其高精度的光學(xué)系統(tǒng)和敏感的探測(cè)器，使得在多個(gè)熒光染料的檢測(cè)中，能有效避免背景信號(hào)的干擾，確保準(zhǔn)確的定量分析。
2. 多通道檢測(cè)功能
該設(shè)備配備了多個(gè)熒光通道，支持多重PCR反應(yīng)。這意味著可以在同一反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因，且不會(huì)出現(xiàn)交叉干擾問(wèn)題。因此，LightCycler 480 II非常適合用于多重PCR實(shí)驗(yàn)、表型基因分析、或進(jìn)行基因型分析。
3. 強(qiáng)大的溫控系統(tǒng)
LightCycler 480 II具備非常精確的溫控系統(tǒng)，可以提供高達(dá)0.1°C的溫度控制精度，這對(duì)實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。其快速升降溫功能保證了PCR過(guò)程中的每個(gè)步驟（如變性、退火和延伸）都能精準(zhǔn)執(zhí)行，提高了實(shí)驗(yàn)效率。
4. 用戶友好的界面與軟件支持
LightCycler 480 II配備了直觀的觸控屏和專用的軟件，可以方便地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)置、數(shù)據(jù)處理和分析。用戶可以通過(guò)軟件輕松選擇所需的反應(yīng)方案，監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程，并進(jìn)行數(shù)據(jù)導(dǎo)出和分析。該儀器的分析軟件支持豐富的功能，包括實(shí)驗(yàn)報(bào)告生成、定量分析、標(biāo)準(zhǔn)曲線生成、溶解曲線分析等。
5. 高通量與多種反應(yīng)格式支持
LightCycler 480 II不僅支持常見(jiàn)的96孔板，還支持384孔板格式，使其適用于高通量實(shí)驗(yàn)。對(duì)于需要處理大量樣本的實(shí)驗(yàn)室，LightCycler 480 II為研究人員提供了極大的便利。無(wú)論是低通量還是高通量的樣本處理，該設(shè)備都能高效、精準(zhǔn)地完成。
6. 全面的檢測(cè)平臺(tái)
LightCycler 480 II適配多種PCR檢測(cè)平臺(tái)，支持熒光染料、探針等多種檢測(cè)方式，能夠滿足多樣化實(shí)驗(yàn)需求。無(wú)論是SYBR Green、TaqMan探針，還是其他常見(jiàn)的熒光標(biāo)記物，LightCycler 480 II都能提供穩(wěn)定的檢測(cè)結(jié)果。
三、應(yīng)用領(lǐng)域
LightCycler 480 II實(shí)時(shí)PCR儀器廣泛應(yīng)用于以下領(lǐng)域：
1. 基因表達(dá)分析
通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中的熒光信號(hào)變化，研究人員可以定量分析特定基因在不同實(shí)驗(yàn)條件下的表達(dá)水平。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于癌癥研究、藥物研發(fā)、環(huán)境生物學(xué)等領(lǐng)域。
2. 基因突變檢測(cè)
實(shí)時(shí)PCR技術(shù)能夠靈敏地檢測(cè)到DNA中的突變，廣泛應(yīng)用于遺傳病診斷、癌癥基因突變篩查等方面。通過(guò)精準(zhǔn)的定量PCR分析，LightCycler 480 II能夠幫助研究人員識(shí)別少量突變體。
3. 微生物檢測(cè)
LightCycler 480 II實(shí)時(shí)PCR儀還被廣泛應(yīng)用于病原微生物的檢測(cè)。其高靈敏度可以幫助檢測(cè)低水平的病原微生物，如病毒、細(xì)菌或真菌，尤其在臨床醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域，實(shí)時(shí)PCR技術(shù)為疾病診斷和公共衛(wèi)生提供了強(qiáng)有力的支持。
4. 藥物篩選與表型分析
在藥物篩選過(guò)程中，實(shí)時(shí)PCR技術(shù)可用于檢測(cè)藥物對(duì)特定基因或病理過(guò)程的影響，幫助藥物研發(fā)人員篩選潛在的候選藥物。同時(shí)，實(shí)時(shí)PCR技術(shù)還廣泛應(yīng)用于表型基因的檢測(cè)與分析，探索基因與性狀的關(guān)系。
四、操作流程
使用LightCycler 480 II進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)的基本步驟如下：
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與樣品準(zhǔn)備
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，設(shè)計(jì)合適的PCR引物和探針，并準(zhǔn)備待分析的樣品。PCR反應(yīng)混合物通常包括DNA模板、引物、探針、熒光染料（如SYBR Green或TaqMan探針）、dNTP、緩沖液、Taq酶等。
加載樣品與設(shè)置反應(yīng)程序
將樣品加載至96孔或384孔PCR板中，并設(shè)置PCR反應(yīng)程序，包括初始變性、退火、延伸等步驟。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)整合適的反應(yīng)條件。
實(shí)時(shí)檢測(cè)與數(shù)據(jù)采集
啟動(dòng)PCR反應(yīng)后，LightCycler 480 II將實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)每個(gè)循環(huán)中的熒光信號(hào)，提供實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)反饋。通過(guò)實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)，可以動(dòng)態(tài)觀察擴(kuò)增過(guò)程，并生成擴(kuò)增曲線。
數(shù)據(jù)分析與結(jié)果輸出
實(shí)驗(yàn)完成后，利用LightCycler 480 II的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，包括定量分析、溶解曲線分析、標(biāo)準(zhǔn)曲線生成等。結(jié)果可以導(dǎo)出為報(bào)告，便于進(jìn)一步的數(shù)據(jù)處理和分析。
五、維護(hù)與保養(yǎng)
為了確保LightCycler 480 II儀器長(zhǎng)期高效運(yùn)行，定期的維護(hù)和保養(yǎng)是必要的。以下是一些基本的維護(hù)建議：
定期清潔光學(xué)組件：確保光學(xué)系統(tǒng)干凈，以避免熒光信號(hào)的干擾。使用適當(dāng)?shù)那鍧嵐ぞ吆头椒ㄇ鍧嵧哥R和探測(cè)器。
校準(zhǔn)與驗(yàn)證：定期校準(zhǔn)儀器，確保溫控系統(tǒng)和熒光探測(cè)系統(tǒng)的精確性。可以進(jìn)行溫度驗(yàn)證和熒光探測(cè)驗(yàn)證。
檢查消耗品和配件：定期檢查PCR板、試劑和其他消耗品的質(zhì)量，確保其在有效期內(nèi)，并適時(shí)更換。
六、總結(jié)
LightCycler 480 II實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是一款功能全面、性能穩(wěn)定的PCR設(shè)備，適用于各類基因研究、疾病診斷、微生物檢測(cè)等領(lǐng)域。其高靈敏度、多通道檢測(cè)、精確的溫控系統(tǒng)和強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析能力，使得該儀器在科研和臨床實(shí)驗(yàn)室中得到了廣泛應(yīng)用。
通過(guò)LightCycler 480 II，研究人員可以高效地開(kāi)展各種定量PCR實(shí)驗(yàn)，獲得準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。無(wú)論是在高通量實(shí)驗(yàn)還是在多重PCR檢測(cè)中，LightCycler 480 II都表現(xiàn)出了性能，是現(xiàn)代生命科學(xué)研究和臨床診斷中重要的儀器之一。
中級(jí)會(huì)員·2年
