復(fù)蘇流程
01準備工作
確保實驗環(huán)境整潔，所需儀器設(shè)備如凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、培養(yǎng)箱等處于良好狀態(tài)。
準備適量的新鮮培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱。
02取出凍存管
從液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出凍存管，注意佩戴防護手套和護目鏡，以防凍傷和液氮濺射。
03快速解凍
將凍存管直接放入預(yù)熱至37℃的恒溫水浴鍋中，不時搖動以加速融化。注意不要讓水浴鍋的水接觸到凍存管的管口，以防污染。
融化時間應(yīng)控制在2分鐘內(nèi)，以減少細胞在解凍過程中受到的損傷。
04消毒與轉(zhuǎn)移
解凍后，用75%酒精擦拭凍存管外部進行消毒，晾干后打開瓶蓋。
將融化的細胞懸液用吸管或移液槍轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的離心管中。
05離心與重懸
根據(jù)細胞類型和離心機的要求，選擇合適的離心速度和時間進行離心。一般情況下，低速離心5分鐘即可。
離心后，棄去上清液中的DMSO等冷凍保護劑，加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
06接種與培養(yǎng)
將重懸后的細胞接種至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
根據(jù)細胞類型和生長情況，適時更換新鮮培養(yǎng)基，去除死細胞和代謝廢物。
注意事項
01無菌操作
整個復(fù)蘇過程必須嚴格進行無菌操作，以防止細胞污染。
02控制時間
解凍時間不宜過長，以免細胞受到損傷。同時，解凍后的細胞應(yīng)盡快接種至培養(yǎng)皿中，以減少在常溫下的暴露時間。
03調(diào)整細胞濃度
如果復(fù)蘇后的細胞濃度過低，可以通過離心后調(diào)整細胞濃度來提高細胞的生長速度。
04觀察與記錄
復(fù)蘇后應(yīng)定期觀察細胞的生長情況，包括形態(tài)、密度和生長速度等。同時，詳細記錄復(fù)蘇細胞的名稱、數(shù)量、復(fù)蘇時間、存放部位等信息，以便后續(xù)跟蹤和管理。
05使用合適的培養(yǎng)基
根據(jù)細胞類型和復(fù)蘇后的培養(yǎng)需求選擇合適的培養(yǎng)基，以保證細胞能夠正常生長。
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