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生物分子類實驗室常用實驗技術原理匯總-4
閱讀：511 發(fā)布時間：2014-12-8九、RT-PCR
RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在*條件下進行。
實驗步驟：
1、RNA的提取；
2、反轉錄合成cDNA；
3、PCR擴增；
4、產物的電泳和結果的測定。
十、實時熒光定量PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）
利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產物量的變化，通過Ct值和標準曲線的關系對起始模板進行定量分析。
閾值：是循環(huán)開始3～15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍，設定在擴增曲線指數增長期。
C(t)值：熒光信號（擴增產物）到達閾值時所經過的擴增循環(huán)次數。