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一、羊痘病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒
通用名:羊痘病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Capripox virus(ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、預(yù)期用途
羊痘是由羊痘病毒引起的一種人畜共患病,以體溫升高,皮膚出現(xiàn)痘疹為主要特征。
羊痘病毒抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)羊血清中羊痘抗體,可用于羊痘疫苗免疫效果評(píng)價(jià)或該病的輔助診斷。
四、羊痘病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒原理
試劑盒由預(yù)包被羊痘核蛋白抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)羊血清樣本中羊痘抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有羊痘抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中抗體含的特異性量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有羊痘抗體。
五、試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、終止液、稀釋板、蓋板膜
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清先按10倍稀釋(如在稀釋板中加入90μl樣品稀釋液再加10μl血清,混勻)。陰、陽性對(duì)照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl,再加入稀釋后的血清10μl。
注:樣本稀釋比例相當(dāng)于1:100。
4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照≤0.2,陽性對(duì)照≥0.6。