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【產品名稱】
商品名稱：艱難梭菌（TCD-A）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）
Name ：Diagnostic Kit for Clostridiumdifficile tcd-A gene （Real-Time PCR Method）
【包裝規(guī)格】50T/盒
【檢驗原理】 本試劑盒用一對艱難梭菌毒素 A 基因特異性引物，，結合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技 術對艱難梭菌毒素 A 基因進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。
本試劑盒僅供科研使用！
【試劑組成】
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| TCD-A 反應液 | 500μL×2 管 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| TCD-A 陽性質控品 | 50μL ×1 管 |
| 陰性質控品 | 250μL ×1 管 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。
【保存和運輸】 上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運 輸，嚴禁反復凍融。
聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制。
PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。
設計引物應遵循以下原則：
①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以最-低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
【儲存條件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。
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