專門(mén)從蛋白質(zhì)中去除寡糖
PNGase F PRIME 是一種從腦膜炎黃桿菌克隆的突變重組 PNGase F并從大腸桿菌中表達(dá)和純化。與其他商業(yè)可用的 PNGase F 來(lái)源相比，對(duì) PNGase F 所做的專有更改已被證明具有*的特性。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室生成的數(shù)據(jù)表明，PRIME 在室溫下可在幾分鐘內(nèi)對(duì)天然糖蛋白和血清糖蛋白起作用。消化產(chǎn)物的聚糖分析表明，PNGase F PRIME 消化導(dǎo)致更*的聚糖釋放，并且當(dāng)在相同的消化條件下以相同的濃度使用時(shí)，還允許裂解市售酶未釋放的聚糖。這一進(jìn)步有利于尋求了解自然環(huán)境中糖生物學(xué)的應(yīng)用程序。初步數(shù)據(jù)表明，與商業(yè)來(lái)源的酶相比，PNGase F PRIME 對(duì)復(fù)雜（三觸角和四觸角）唾液酸化結(jié)構(gòu)具有更高的特異性。此外，本文介紹的工作分析化學(xué)論文使用 PNGase F PRIME 進(jìn)行所有原位組織工作，因?yàn)槭惺鄣?PNGase 酶不適用于天然組織以允許聚糖識(shí)別。

PNGase F PRIME-LY 糖苷酶與我們的標(biāo)準(zhǔn) PNGase F PRIME 是相同的酶，但現(xiàn)在以凍干形式提供，非常適合用于基于溶液的分析。可以使用 PNGase F PRIME-LY 的性能特征和應(yīng)用與我們的標(biāo)準(zhǔn)液體格式 PNGase F PRIME 酶*相同。

• 非常適合用于高級(jí)應(yīng)用，尤其是那些使用或需要 UPLC/HPLC、親水相互作用色譜 (HILIC) 和/或 MALDI-聚糖質(zhì)譜成像的應(yīng)用。

• 釋放的聚糖可以在使用 Waters RapiFluor-MS 染料標(biāo)記后進(jìn)行檢查，并使用各種基于 HPLC/UPLC 的系統(tǒng)通過(guò)正相親水相互作用色譜 (HILIC) 進(jìn)行分析。

• 在組織上噴灑酶并在 37°C 下孵育 1 小時(shí)后，可以直接對(duì)組織上釋放的聚糖進(jìn)行成像。（在我們的 2mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)濃度下，一個(gè) 50 µL 小瓶可以制作 4 張載玻片。）可以使用 Bruker Daltonics SolariX™ 7T Hybrid FTMS System、Bruker Daltonics RapifleXTM MALDI Tissuetyper 或 Bruker Daltonics UltrafleXtreme 等儀器檢測(cè)聚糖。 MALDI-TOF/TOF 質(zhì)譜儀。

Peak-a-boo we see you
質(zhì)譜分析是 PRIME 真正大放異彩的時(shí)候。與 PRIME 相比，傳統(tǒng)的 PNGase 提供的峰更少且更鈍。迄今為止，在幾乎所有的并行研究中，PNGase F PRIME 都產(chǎn)生了良好的結(jié)果。例如，用 PRIME 治療的天然 Avastin®（基于 IgG1 的癌癥治療劑）會(huì)釋放 11 種不同的寡糖結(jié)構(gòu)（以下僅顯示一部分?jǐn)?shù)據(jù)）。

在另一個(gè)例子中，與非常流行的 PNGase F 相比，PRIME 在切割天然形式的血源性糖蛋白胎球蛋白時(shí)產(chǎn)生的峰多 33%、峰更尖且背景低得多。

即使通過(guò) HPLC 分析，相同的處理也顯示出顯著差異。PNGase F PRIME（藍(lán)色）比相同的競(jìng)爭(zhēng) PNGase F（黑色）顯示出更明顯的峰。還要注意中性和唾液酸化區(qū)域的附加峰，特別是 trisialo 區(qū)域。

這種更豐富的數(shù)據(jù)提供了對(duì)糖生物學(xué)進(jìn)行更深入、更完整理解的機(jī)會(huì)。

前列腺癌 FFPE 組織的 N-聚糖成像
如 Powers 等人所述，對(duì)人類前列腺癌 (Gleason 7) 的 5 微米 FFPE 切片進(jìn)行抗原回收并與 PNGase F PRIME™ 一起孵育。使用 7T MALDI-FTICR Solarix 質(zhì)譜儀和 FlexImaging 4.1 軟件獲取圖像。右上圖顯示的是組織的 H&E 染色圖像（放大 10 倍），腫瘤密度高的區(qū)域顯示在圓圈中，用 T 標(biāo)記。左下圖顯示了典型的腫瘤 N-聚糖單個(gè)聚糖的模式，Man6 在 m/z=1419。在右上圖和右下圖中，m/z = 1419（綠色）處的腫瘤聚糖和 m/z = 1976 處的單唾液酸化雙觸角聚糖（右上圖，橙色）顯示了雙聚糖疊加) 和 m/z = 2122 處的單唾液酸化和核心巖藻糖基化聚糖（右下圖，藍(lán)色）。

以下引文提供了使用 PRIME™ 的這項(xiàng)研究的更多詳細(xì)信息：

Powers TW、Neely BA、Shao Y、Tang H、Troyer DA、Mehta AS、Haab BB、Drake RR。(2014)福爾馬林固定石蠟包埋臨床組織塊和組織微陣列中 N-聚糖的 MALDI 成像質(zhì)譜分析。公共科學(xué)圖書(shū)館一號(hào)。9(9):e106255

Powers, TW Holst, S., Wuhrer, M.,Mehta, AS, Drake, RR (2015)使用 MALDI 成像質(zhì)譜法繪制肝細(xì)胞癌組織的二維 N-聚糖分布圖。生物分子，5，2554-2572。