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平滑肌細胞培養(yǎng)基的應(yīng)用介紹

閱讀：1427 發(fā)布時間：2023-1-5

　　平滑肌細胞培養(yǎng)基是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO?的氣體環(huán)境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng)，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清(10%)。

　　平滑肌細胞培養(yǎng)基SMCM可用于平滑肌細胞增殖實驗：

　　以25cm²(50ml)一次性培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞，細胞在經(jīng)過消化傳代后明顯較原代胖大，細胞可自行沿一定方向生長，表現(xiàn)為峰谷樣圖案。平滑肌細胞隨著傳代次數(shù)增多，體積會逐漸增大，突觸明顯并逐漸喪失梭形結(jié)構(gòu)，當細胞生長密集時，擁擠的細胞逐層環(huán)繞，中心可隆起呈結(jié)節(jié)狀。將酶消化法獲得的細胞傳代至第3代，分別以平滑肌細胞培養(yǎng)基SMCM或含10%新生牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(10%-F12)進行培養(yǎng)，及時記錄細胞生長情況。以每孔2000個細胞為標準將第3代平滑肌細胞接種于96孔板內(nèi)，每個樣本需重復(fù)3～4個輔助測量孔。將96孔板靜置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)，6小時后觀察細胞貼壁、舒展。以每100μl培養(yǎng)基加10μlCCK-8試劑的比例配置混懸劑。清除各待測孔培養(yǎng)基后，每孔加入混懸劑100μl。將96孔板靜置于培養(yǎng)箱內(nèi)2h后取出，置于微孔板振蕩器上震蕩1min，將96孔板轉(zhuǎn)至酶標儀，在450nm波長下讀取各孔數(shù)據(jù)并記錄。測量吸光值后的孔不再重復(fù)使用。每24h測量一次實驗孔吸光值，連續(xù)測量9天(216h)。觀察結(jié)果。

　　使用該培養(yǎng)基時應(yīng)注意將基礎(chǔ)介質(zhì)儲存在4℃，將SMCGS、FBS和P/S溶液儲存在-20℃。避光保存。

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