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ViralStars LP110 慢病毒包裝試劑盒
Lentivirus Packaging Kit
ViralStars LP110 慢病毒包裝試劑盒
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒,直徑為80-120 nm,呈二十面體對稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細(xì)胞的類型),再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼,最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。
慢病毒表達(dá)載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)??商峁?/span>包裝重組慢病毒載體所需的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細(xì)胞,在細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,可以直接或濃縮后用于宿主細(xì)胞的感染。
慢病毒感染細(xì)胞的第一步是通過包膜蛋白與細(xì)胞表面受體結(jié)合。慢病毒與宿主細(xì)胞膜融合后釋放結(jié)構(gòu)蛋白、酶蛋白和病毒核心。病毒RNA在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下逆轉(zhuǎn)錄并與整合酶形成整合前復(fù)合物。整合前復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核后,整合酶催化其整合至宿主基因組。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄為mRNA,回到細(xì)胞漿中,表達(dá)目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。
ViralStarsTM LP Lentivirus Packaging Kit慢病毒包裝試劑盒屬于第二代慢病毒包裝體系,同時可兼容第二代和第三代慢病毒包裝質(zhì)粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒,即產(chǎn)生的慢病毒感染目的細(xì)胞后不會再感染其他細(xì)胞,也不會利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。ViralStarsTM LP Lentivirus Packaging Kit包裝的慢病毒具有感染效率高、感染譜廣等特點,可實現(xiàn)外源基因在宿主細(xì)胞中的穩(wěn)定持續(xù)表達(dá)。經(jīng)該試劑盒包裝獲得的對照質(zhì)粒病毒滴度可達(dá)108 TU/mL。
ViralStarsTM LP Lentivirus Packaging Kit慢病毒包裝試劑盒包含如下組分:
(1) 優(yōu)化配比的慢病毒包裝輔助質(zhì)粒混合物(Package Plasmid Mix),經(jīng)過設(shè)計調(diào)整,可兼容大多數(shù)慢病毒表達(dá)載體,確保將重組子包裝成具有高感染率的慢病毒顆粒。
(2) 表達(dá)GFP 和 Puro標(biāo)記的對照質(zhì)粒(Control Plasmid),便于觀察病毒包裝效率及測定病毒滴度。
適用范圍
兼容大多數(shù)慢病毒表達(dá)載體,經(jīng)過設(shè)計及優(yōu)化配比,確保將重組子包裝成具有高感染率的慢病毒顆粒,同時防止病毒的自我復(fù)制。
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