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多酚氧化酶（PPO）檢測(cè)試劑盒（鄰苯二酚微板法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1542

產(chǎn)品規(guī)格：120T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆蟲的質(zhì)體中，甚至在土壤中腐爛的植物殘?jiān)隙伎梢詸z測(cè)到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一種蛋白體，在茶樹生命活動(dòng)和茶葉加工過(guò)程中參與一系列由酶促活動(dòng)而引起的化學(xué)變化，故又被稱為生物催化劑。該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

尚寶生物多酚氧化酶(PPO)檢測(cè)試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測(cè)原理是以鄰苯二酚作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測(cè)定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀420nm處檢測(cè)吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算。該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的多酚氧化酶活性，尤其適用于檢測(cè)水果中多酚氧化酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        研缽或勻漿器

3.        離心管或試管

4.        低溫離心機(jī)

5.        酶標(biāo)板

6.        酶標(biāo)儀

操作步驟：

1.        準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的PPO Lysis buffer 研磨或勻漿，10000g，4℃離心 15-20min，留取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測(cè)。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿，10000g，4℃離心15-20min，取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測(cè)。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2.        PPO加樣：按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，注意：對(duì)照孔、測(cè)定孔中為同一待測(cè)樣品，但對(duì)照孔中為提前加熱煮沸5min的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PPO活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行孔，求平均值。

3.        PPO 檢測(cè)：立即以酶標(biāo)儀，以對(duì)照孔為對(duì)照，測(cè)定420nm處對(duì)照孔的吸光度(A測(cè)定0 )；1min后立即測(cè)定 420nm 處測(cè)定孔的吸光度(A測(cè)定1)。

計(jì)算：

PPO活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下，每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個(gè)活性單位。

組織樣本PPO(U)={(A_測(cè)定1 -A_測(cè)定0 )×V _T }/(W×V _S ×0.01×t)

式中：A_測(cè)定 1 =反應(yīng)1min后測(cè)定孔的吸光度

A_測(cè)定 0 =加入PPO Assay buffer立即測(cè)定的測(cè)定孔吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T =提取酶液的總體積(ml)

V_S =測(cè)定時(shí)所用酶液體積(ml)

液體樣本PPO(U)=(A_測(cè)定1 -A_測(cè)定0 )/(0.01×t)

式中：A_測(cè)定1 =反應(yīng)1min后測(cè)定孔的吸光度

A_測(cè)定0 =加入PPO Assay buffer立即測(cè)定的測(cè)定孔吸光度

t=反應(yīng)時(shí)間

注意事項(xiàng)：

1.        待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2.        PPO酶液提取時(shí)，注意低溫操作，防止酶活性。4℃保存2-3天，亦可-20℃保存。

3.        以煮沸的酶液為對(duì)照時(shí)，酶要充分失活。

4.        如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定；每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。

有效期：6個(gè)月有效。