細胞傳代培養(yǎng)詳解（實戰(zhàn)總結）

細胞傳代培養(yǎng)詳解（實戰(zhàn)總結）

1、什么是細胞培養(yǎng)

培養(yǎng)的細胞由于細胞增殖，數量增加，細胞難以繼續(xù)生長繁殖，需要進行分瓶培養(yǎng)，將培養(yǎng)的細胞分散，以1:2或1:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)，一般細胞可傳代10-50代

2、細胞的貼壁過程

3、培養(yǎng)細胞的一代生長過程

①潛伏期：細胞從接種到貼壁生長繁殖的一段時間

二倍體細胞系該段時間較長，大概為24-96h；連續(xù)細胞系時間短，大概10-30min

②指數生長期：細胞增殖最旺盛時期，此時進行細胞實驗較佳

指數生長期持續(xù)3-5d后，隨細胞數量不斷增多，生長空間日趨減少，細胞相互接觸匯合成片，呈現接觸抑制。而惡性細胞則無接觸抑制現象；癌細胞則由于營養(yǎng)成分的消耗和細胞代謝產物的影響而發(fā)生密度抑制。

③停滯期：細胞數量達到飽和密度后，細胞與營養(yǎng)液的交換面積減少，代謝產物積累，pH下降細胞停止增殖，進入停滯期。此時應該進行細胞傳代，但是得傳1-2代細胞才能恢復。

4、細胞傳代的一般步驟

a、懸浮細胞

可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代，或用離心法后，加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代

b、貼壁細胞

①實驗準備，超凈臺噴灑酒精，紫外照射30min。準備好培養(yǎng)瓶/皿，離心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，帶上手套等

②倒去舊培養(yǎng)基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉積的死細胞等

③加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現空隙時，倒去酶液。

④加入1～2滴管含有血清的培養(yǎng)液，反復吹打細胞，使其成細胞懸液

⑤以1：2或1：3進行分裝，補充新鮮培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)瓶上做好標記，注明代號、日期，輕輕搖勻，37℃CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

⑥細胞培養(yǎng)24h后，即可觀察培養(yǎng)液的顏色及細胞的生長情況

5注意事項

①傳代培養(yǎng)時要注意無菌操作并防止細胞之間的交叉污染。所有操作要盡量靠近酒精燈火焰。每次最好只進行一種細胞的操作

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