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索氏提取法的原理、方法、注意事項(xiàng)
索氏提取器中,經(jīng)典的莫過于根據(jù)索氏抽提原理、用重量法來測(cè)定脂肪含量。
抽提法是測(cè)定粗脂肪含量*普遍的方法,抽提法利用重量法的原理,即先將樣品溶于脂肪溶劑中,然后利用索氏提取器將脂肪循環(huán)抽提,*后再測(cè)出抽提前后儀器的重量差,即脂肪的重量。抽提法需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)過程,如果過程沒有掌握好,很可能嚴(yán)重影響到脂肪的*后含量。下面,我們主要來看看用索氏抽提法測(cè)定脂肪時(shí)應(yīng)該注意的事項(xiàng)。
?。?)樣品應(yīng)干燥后研細(xì),裝樣品的濾紙筒一定要緊密,不能往外漏樣品,否則重做。
?。?)放入濾紙筒的高度不能超過回流彎管,否則**不易穿透樣品,脂肪不能全部提出,造成誤差。
(3)碰到含多量糖及糊精的樣品,要先以冷水處理,等其干燥后聯(lián)通濾紙一起放入提取器內(nèi)。
?。?)提取時(shí)水浴溫度不能過高,一般使**剛開始沸騰即可(約45℃左右)?;亓魉俣纫悦?-12次/時(shí)為宜。
(5)所用**必須是無(wú)水**,如含有水分則可能將樣品中的糖以及無(wú)機(jī)物抽出,造成誤差。
(6)用于樣品測(cè)定脂肪,可按下式計(jì)算原來樣品脂肪的含量.
脂肪(﹪)=( W1-W0)/W*(100-A)
脂肪(%)= 物的耐鹽性得到不同程度提高。其中Zhang和Blumwald(2001)、Zhang等(2001)報(bào)告的轉(zhuǎn)AtNHX1基因番茄可耐200mmol/L的氯化鈉,并把吸收的鈉鹽積累在葉片中,而果實(shí)的品質(zhì)不受影響。這些研究預(yù)示著在提高植物耐鹽性方面,離子的選擇吸收和跨膜運(yùn)輸?shù)幕蚬こ淌侵参锬望}性種質(zhì)改良的有效途徑。
A-100克樣品水分的含量(克).
(7)冷凝管上端*好連接一個(gè)氯化鈣干燥管,這樣不僅可以防止空氣中水分進(jìn)入,而且還可以避免**揮發(fā)在空氣中,這樣可防止實(shí)驗(yàn)室微小環(huán)境空氣的污染。如無(wú)此裝置,塞一團(tuán)干脫脂棉球亦可。
(8)如果沒有無(wú)水**可以自己制備,制備方法如下:在1000毫升**中,加入無(wú)水石膏50克,振搖數(shù)次,靜置1 0小時(shí)以上蒸餾,收集35℃以下的餾液,即可應(yīng)用。
(9)將提取瓶放在烘箱內(nèi)干燥時(shí),瓶口向一側(cè)傾斜45℃放置使揮發(fā)物**易與空氣形成對(duì)流,這樣干燥迅速。
(10)樣品及醚提出物在烘箱內(nèi)烘干時(shí)間不要過長(zhǎng),因?yàn)橐恍┖懿伙柡偷闹舅?,容易在加熱過程中被氧化成不溶于**的物質(zhì);中等不飽和脂肪酸,受熱容易被氧化而增加重量.在沒有真空干燥箱的條件下,可以在100-105℃干燥1.5-3小時(shí)。
(11)如果沒有**或無(wú)水**時(shí),可以用石油醚提取,石油醚沸點(diǎn)30-60℃為好。
(12)使用揮發(fā)**或石油醚時(shí),切忌用直接火加熱。應(yīng)用電熱套電水浴,電燈泡等.