技術(shù)文章
細(xì)胞增殖科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀:77 發(fā)布時間:2024-9-18
應(yīng)用簡介
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物,以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞。
檢測方法
MTT,CCK-8,BrdU,EdU等方法是常見的細(xì)胞增殖檢測技術(shù),分別從代謝活性和DNA合成的角度來反應(yīng)細(xì)胞的增殖情況。MTT和CCK-8檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的一些脫氫酶能使檢測試劑還原為甲瓚,而死細(xì)胞無此功能。BrdU和EdU則能都在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子,通過基于與熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性。
MTT技術(shù)原理
活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定其光吸收值,在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值),來判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越?。?br/>
實驗方法
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1、鋪板密度不合理,均勻度不一致;
2、實驗分組不嚴(yán)謹(jǐn);
3、實驗設(shè)置時間點不合理;
4、MTT或CCK8加樣時注意事項不明確;
5、血清等影響:高濃度血清或藥物顏色會影響試驗孔的吸光度值;
6、邊緣效應(yīng):邊緣孔的水分揮發(fā)較快,藥物易被濃縮。