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操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9）在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；
補(bǔ)體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過長或凝固不全等；
控制方法：采血時(shí)規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時(shí)采用無菌試管，經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存；保存時(shí)間不宜過久，檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本；對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優(yōu)點(diǎn)：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、性價(jià)比非常好，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

Tungsticacid(T-4)-二合鎢5克AR，85%

Tungsten(VI)oxide鎢500克4N，0.2㎜

Tungstenhexachloride六化鎢25克3.5N，0.1㎜

Tungstencarbide一化鎢25克5N

Tungsten鎢25克AR，99.7%

TTP三脫胸苷鹽500毫克生物技術(shù)級(jí)，95%

TTHA三四六0.5毫升BR，1Mm/L

TTAC肉豆蔻基三基化銨5克AR，顆粒

TTAB溴化十四基三基銨1克AR，粉末

TTA1-(2’-酰)-3,3,3-三5克BR

TSPPdecahydrate焦四十水物1克高，

TSPP焦四10克高，

TSP正100克特，

TSP無水三100克AR，99%

TSC基脲5克AR，19.3%
RabbitCollagenaseTypeIIElisaKit生物活性測(cè)定陽性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Positive Bioreaction  

聚標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyvinyl Alcohol  9002895

聚酯分散體標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyvinyl Acetate Dispersion  9003207

聚酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyvinyl Acetate   9003207

聚山梨酯80標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polysorbate 80   9005656

聚山梨酯60標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polysorbate 60 (AS)  9005678

聚山梨酯40標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polysorbate 40 (AS)  9005667

聚山梨酯20標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polysorbate 20   9005645

油聚烴酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl Oleate  9004960

硬脂聚二50標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl 50 Stearate  9004993

硬脂聚二40標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl 40 Stearate   9004993

聚硬脂酯20標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl 20 Stearyl Ether (AS)  9005009

聚硬脂酯2標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl 2 Stearyl Ether (AS)  9005009

聚二15羥基硬脂標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl 15 Hydroxystearate  70142346

聚硬脂酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Polyoxyl 10 Stearyl Ether  9005009

亞麻油  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Linolenicacid  含量:AR，98%

亞鉛粉  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Zinc  含量:AR，99%

亞基R鹽  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:NitrosoRsalt  含量:BS

亞基胲  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Acetaldoxime  含量:AR，99%

煙  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:VB3  含量:BS

煙酰  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:VPP  含量:高

煙酰腺嘌呤二核苷四鹽  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:TPNH2Na4  含量:BR，25u/ul

延胡索  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:TMEDA  含量:高，99%

鹽基性碳銅  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Cupricsubcarbonate  含量:CP，99%

鹽3O左旋肉  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:ALCAR  含量:BR，98%

測(cè)定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。