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操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；
補(bǔ)體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時間過長或凝固不全等；
控制方法：采血時規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時采用無菌試管，經(jīng)檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本；對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優(yōu)點(diǎn)：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、性價比非常好，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

Thio-NAD代輔酶5克BR，9u/mg

Thiomichler'sketone4,4-雙(二基)代二100克BS，85%

ThioflavineS四羥S25克BR，470/570NM

ThioflavinT性黃1100微克BR，550/630NM

ThiocarbanilideN,N-二基脲100克CP

ThiazoleOrange噻唑橙25克試級，

THFA四化麩100毫升AR，96%

ThermolysinfromBacillusthermoproteolyticusrokko嗜熱菌蛋白酶25克生物技術(shù)級，30u/mg

Theophylline1,3-二基2KU高，

THAM緩血銨100克高，90%

TG谷酰轉(zhuǎn)酶100克試級，97%，二，三水物

TFEA三25克CP，

Tetraterbiumheptaoxide鋱500克CP，97.5%

Tetrapropylammoniumbromide四溴化銨25克BR，

Tetramethylammoniumiodide化四基銨1克AR，
PGE1ElisaKit泛消旋體標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Panthenol, Racemic   16485102

庫銨標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Pancuronium Bromide   15500660

胰酶標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Pancreatin Amylase and Protease (COLD SHIPMENT REQUIRED),Diastase vera；Pancrease   8049476

撲標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Pamoic Acid   130858

帕米膦標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Pamidronate Disodium   109552150

棕櫚標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Palmitic Acid   21096

棕櫚油標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Palm Oil (AS)  8002753

對二氨基異辛酯標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Padimate O   21245023

紫杉雜質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Paclitaxel Impurity Mixture   

紫杉標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Paclitaxel   33069624

羥鑒別標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Oxytocin Identification  6233836

鹽土霉素標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Oxytetracycline Hydrochloride   2058460

土霉素標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Oxytetracycline   6153646

羥標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Oxymorphone CII  76415

羥稀龍標(biāo)準(zhǔn)品  英文名稱：Oxymetholone CIII  434071

亞錫  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Tin(II)oxide  含量:CP，98%

青霉素  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Piperacillin  含量:BR，牛心，95%

野靛  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Cytisine  含量:BR

野黃芩  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Scutellarin  含量:AR，95%

葉綠醌  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:VK1  含量:顯色

葉綠素A  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:ChlorophyllA  含量:BR，中粘度200

葉綠素  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Chlorophyll  含量:BR，85%

葉綠素鎂  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:ChlorophyllB  含量:BR，低粘度100

葉綠銅  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:Chlorophyllin  含量:BR，98%

葉  進(jìn)口、國產(chǎn)  英文名稱:PGA  含量:色固

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當(dāng)時，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。