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操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9）在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；
補(bǔ)體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等；
控制方法：采血時(shí)規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管，經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存；保存時(shí)間不宜過(guò)久，檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本；對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優(yōu)點(diǎn)：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、性價(jià)比非常好，節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

VAELISAKit大鼠維生素ACAS:224070進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

RNP-Ab(anti-ribonucleoproteinAntibody)ELISAKit人抗核糖核蛋白抗體CAS:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：50mg

Gelsolin(Gelsolin)ELISAKit小鼠凝溶膠蛋白CAS:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

Beta-TGELISAKit大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白CAS:69945進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：35mg

PF/CXCL4ELISAKit大鼠血小板子4CAS:215937進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

RANKL(receptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand)ELISAKit小鼠核子κB受體活子配基CAS:310559進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

n-DNA-Ab(naturaldeoxyribonucleicacidantibody)ELISAKit人抗天然脫核糖核抗體CAS:3215717進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

TpP(thrombusprecursorprotein)ELISAKit小鼠血栓前體蛋白CAS:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：200mg

DHTELISAKit大鼠雙睪CAS:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：20mg

ENA-Ab(anti-extractablenuclearantigenantibody)ELISAKit人抗可提取核抗原抗體CAS:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：400mg

DNP-Ab(deoxyribonucleicproteinantibody)ELISAKit人抗脫核糖核蛋白抗體CAS:5618進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：250mg

CTGFELISAKit大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)子CAS:289817進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：200mg

GnRH(gonadotropin-releasinghormone)ELISAKit小鼠促性腺激素釋放激素CAS:289109進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：30mg

INH-BGnRH(inhibinB)ELISAKit小鼠抑制素BCAS:7455進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：25mg

AsAbELISAKit大鼠抗抗體CAS:6455進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)規(guī)格：500mg
VE elisa試劑盒15-脫尤可甾PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit *Steady Glow*IGF-1白細(xì)胞介素21檢測(cè)試盒

15-異海松-8,18-二PhosphoWorks™ Luminometric ATP Assay Kit *Bright Glow*VD3胰島素樣生長(zhǎng)因子1檢測(cè)試盒

16-貝殼杉-2,6,15-三PhosphoWorks™ Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit *Blue Fluorescence*Estradio-17β維生素D3檢測(cè)試盒

19-羥基漿果赤霉素 IIIPhosphoWorks™ Fluorimetric Pyrophosphate Assay Kit *Green Fluorescence*Lfcin17β雌二檢測(cè)試盒

1-基-2-戊基-4(1H)-啉酮PhosphoWorks™ Fluorimetric ADP Assay Kit *Red Fluorescence*25(OH)D2乳鐵蛋白肽檢測(cè)試盒

1-基羰基-beta-咔啉PhosphoWorks™ Fluorimetric Phosphate Assay Kit *Blue Fluorescence*1,25(OH)2D25羥基維生素D2檢測(cè)試盒

測(cè)定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。