酶標儀儀器介紹
酶標儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器。大體可分為半自動和全自動2大類,兩大類的工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來分析抗原或抗體的含量。 ELISA測定一般要求測試液的終體積在250u l以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。
原理
酶標儀的基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同,因此酶標儀實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計。 光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標本.該單色光一部分被標本吸收,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應的電信號.電信號經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算,后由顯示器和打印機顯示結(jié)果. 微處理機還通過控制電路控制機驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程.微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔內(nèi)都包埋著相應的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.酶標儀中所屬的光是電磁波,紫外光的波長100nm~400nm,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大于780nm稱為紅外光。酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。
檢測單位
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。檢測單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關(guān)系:
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來的光強度。
OD值由下述公式計算:E=OD=a×b×c
c為檢測物的濃度 b為檢測物的厚度 a為摩爾因子在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結(jié)果的不準確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進行檢測,稱為測量波長。但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準確性。在參照波長下,檢測物光的吸收小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。