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NuSmart^®核酸直接釋放技術(shù)在EDTA抗凝血中應(yīng)用第2篇

血常規(guī)檢測中最經(jīng)常使用的就是EDTA抗凝血，它能夠用于血細(xì)胞形態(tài)、生化檢測、血型鑒定、標(biāo)志物檢測、基因篩查等。常見的基因篩查都涉及到核酸提取和擴(kuò)增。檢驗(yàn)科或者實(shí)驗(yàn)室最常使用的方法就是離心柱或者磁珠提取法進(jìn)行DNA或者RNA提取。但是以上方法有以下盲點(diǎn)：

1、離心柱提取無法自動化，一次提取量受限于離心機(jī)規(guī)模，而且無法高通量操作；

2、磁珠提取法雖然能夠高通量，但是設(shè)備昂貴；

3、離心柱或者磁珠提取血量一般不低于200-300µL；

4、離心柱提取的核酸含量比較高，而磁珠依據(jù)廠家不同得率不穩(wěn)定；

5、前處理時(shí)間比較長；

6、離心柱的批間差異相對于磁珠更好控制；

綜上所述，兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，在通量、效率、自動化上很難兩全。鑒于此情況，我司開發(fā)的NuSmart^®核酸直接釋放技術(shù)和EDTA血檢測相結(jié)合，僅需要10-20抗凝血，同時(shí)可以處理百份甚至千份血液。所含試劑中不包含有生物酶制劑，例如蛋白酶K，所以批間差異很小。總結(jié)如下：

— EDTA血量少

— 5分鐘處理

— 高通量樣本量

— 無腦操作

— 無需大型設(shè)備

 

操作流程

 

案例A 不同體積人EDTA抗凝血處理后擴(kuò)增4對引物

 

1、0.1μL   2、1μL   3、10μL   4、20μL   5、50μL   6、100μL   7、200μL

使用NuSmart^®血液 PCR 試劑盒Plus（貨號Nu-B02）處理不同體積人EDTA抗凝血，使用2×Master TaqMix(With Dye)分別擴(kuò)增4對引物。

 

案例B 人EDTA抗凝血處理后在50μL體系下擴(kuò)增

 

1、1μL   2、2μL   3、5μL   4、10μL   5、15μL   6、20μL   7、23μL

使用NuSmart^®血液 PCR 試劑盒Plus（貨號Nu-B02）處理10μL人EDTA抗凝血。在50μL擴(kuò)增體系中，使用1μL到23μL模版體積擴(kuò)增4對引物。